Determinación De Proteína Total

DETERMINACIÓN DE PROTEÍNA TOTAL

Calderón Porras, Jemina & Mora Román, Juan José
Estudiantes de Ingeniería en Biotecnología, Escuela de Biología, ITCR

RESUMEN

Con esta práctica, se busca determinar mediante el método de espectrofotometría de luz visible, la concentración de proteínas en una muestra de suero bovino, por medio de la comparación con una muestra patrón. Los resultadosobtenidos muestran mediante la prueba de Biuret la presencia de proteínas en la muestra y el patrón, debido a la coloración violeta que adquieren al adicionar el reactivo. La muestra utilizada para determinar la concentración de albúmina fue de suero bovino, pero esta se puede tomar como referencia para la muestra de suero de un paciente ya que este presenta una concentración de proteínas(albúmina) similar a la de los seres humanos. Al comparar los valores de absorbancia de la muestra y el patrón y después de realizar algunos cálculos se logro determinar que la concentración de proteína en el suero era de 4.43 g/dL. Con esto se puede concluir que la concentración de albúmina es bajo ya que el valor es inferior a los límites normales de concentración de la proteína en los seres humanosque oscila entre 5,8 – 8,0 g/dL, por lo tanto se concluye que existe una deficiencia de la proteína en el paciente.

Palabras Clave: espectrofotómetro, prueba de Biuret, proteína, albúmina.

INTRODUCCIÓN
La absorción de luz que tiene una sustancia cuando es atravesada por un haz de luz es una propiedad física intrínseca de cada sustancia, esto es llamado espectro de absorción, losproductos de organismos vivos como las clorofilas, ácidos nucleicos o proteínas, tienen la propiedad de absorber la luz en un espectro que va de ultravioleta (200-400 nm), visible (400-800 nm) o infrarroja (de 800 nm a 50 um). (Enciclopedia Microsoft® Encarta® 2005)
Estas determinaciones se realizan a través de un espectrofotómetro, el cual tiene varias partes como la fuente de luz que es unalámpara con voltaje controlado. El monocromador que puede ser un filtro o un juego de filtros para que elimine longitudes de onda, con la excepción de las de banda estrecha, también puede ser un dispositivo de rendija y prisma para que la luz que pase por ahí salga en forma de matices, o bien una rejilla de difracción con rendijas, la cual tiene la misma función que el prisma. Por último otra partefundamental de un espectrofotómetro es la fotocelda y el galvanómetro, que es donde se mide la luz del instrumento. (Brumblay, 1976)
Para cuantificar proteínas en una muestra, el método más habitual es el de espectrofotometría el cual consiste en usar un espectrofotómetro obteniendo la absorbancia de una solución patrón y muestra, posteriormente se realizan algunos cálculos y se obtiene laconcentración de la proteína en dicha muestra.
Dentro de las utilidades del espectrofotómetro se encuentran: la determinación de la concentración proteica y para el seguimiento de la desnaturalización proteica. (Enciclopedia Microsoft® Encarta® 2005)
La ley fundamental que relaciona la concentración de una sustancia con la intensidad de absorción a determinada frecuencia es la conocida como Ley deLambert-Beer. La aplicación de ésta ley es muy sencilla, sólo se necesita medir la transmisión en una longitud de onda adecuada para la sustancia a medir, un disolvente transparente y conocer su espectro de absorción y recipientes adecuados para la prueba. (Enciclopedia Microsoft® Encarta® 2005)
Las proteínas constituyen la mayor porción de solutos en el plasma. Las proteínas del suero sedividen en dos fracciones Albúmina y Globulina. La albúmina representa el más abundante constituyente de las proteínas, mientras que las globulinas son un grupo heterogéneo de componentes como las inmunoglobulinas, complemento, enzimas, factores de coagulación, hormonas y proteínas de transporte específicas. (Cima Scientific, 2007)

El procedimiento para determinar las proteínas totales  es una...