Determinacion de azúcares reductores

Objetivo de la práctica
Esta práctica consiste en determinar la cantidad de azúcar reductor que contienen tres muestras problema. Partimos de tres muestras problema cuya concentración desconocemos y queremos averiguar. Para ello mezclamos esas muestras con diferentes reactivos y realizamos una espectrofotometría que nos dará unos valores de absorbancia que por sí solos no nos llevan alresultado que deseamos. Preparamos unas disoluciones que, además de contener los mismo reactivos que las anteriores, tendrán diferentes concentraciones de una muestra de glucosa cuya concentración inicial si conocemos. Si estas muestras de concentración conocida las llevamos al espectrofotómetro nos darán unos valores de absorbancia que nos permitirán realizar una curva de calibrado. Esta curva decalibrado nos dará una ecuación: y= ax+b Donde, y es la absorbancia y x es la concentración. Si hallamos x, obtendremos el valor de la concentración para las disoluciones de la curva de calibrado. Sabiendo que esas disoluciones contienen un volumen final Vf y sabiendo el volumen inicial Vi de las disoluciones de las muestras problema podemos obtener la concentración de azúcares reductores en las muestrasproblema.

Bases teóricas
Para lograr el objetivo se va a emplear el método de Somogyi-Nelson. Este método, permite determinar la cantidad de azúcares reductores liberados capaces de reducir en un medio alcalino el ión cúprico (Cu+2) a ión cuproso (Cu+). El método se denomina así porque está formado por dos reactivos diferentes, el reactivo Somogyi y el Nelson. El reactivo Somogyi se componede una parte Cúprica y una parte alcalina, La parte cúprica (Somogyi II) contiene sulfato de cobre, sulfato de Sodio y agua destilada. Mientras que la parte alcalina (Somogyi I) contiene carbonato sódico, bicarbonato sódico, tartrato sódico-potásico, sulfato de sodio anhidro y agua destilada. Al agregar un medio alcalino al reactivo Somogyi II favorece la reducción de las sales cúpricas a cuprosaspor la acción reductora de los glúcidos mientras que el agregado de sulfato de sodio tiene como objeto impedir la reoxidación de las sales cuprosas formadas por la acción de los glúcidos. El reactivo Nelson, compuesto por Molibdato de Amonio, Arseniato de sodio dibásico, ácido sulfúrico y agua destilada, al reaccionar con los iones cuprosos formados por la acción reductora de los glúcidos hacenque el molibdeno hexavalente se reduzca y la disolución tome un color azul intenso que es proporcional a la concentración inicial de azúcar reductor. Este complejo azulado puede cuantificarse espectrofotométricamente para así obtener una curva de calibrado y hallar las concentraciones deseadas.

Materiales
Doce tubos de ensayo con tapón roscado Un agitador Vortex Dos pipetas automáticas dediferente graduación. Un vaso de precipitado de 50 ml.

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Una probeta de 25 ml graduada. Frasco lavador. Espectrofotómetro con una cubeta. Baño termostático.

El espectrofotómetro se basa en la transmisión de luz a través de una solución para determinar la concentración de un soluto en disolución. Consiste en una fuente de luz, un prisma que descompone la luz en las distintas longitudes de onda,una cubeta para la muestra y una fotocélula que permite convertir la energía recibida en señales digitales. El resultado es la cantidad de luz transmitida por la muestra, la cual disminuye cuando aumenta la concentración de esta. La relación entre la luz y la concentración es logarítmica por eso se usa el término absorbancia (A) que incrementa linealmente con la concentración de la muestra. Elbaño termostático consta de una resistencia eléctrica que calienta el agua destilada que contiene el recipiente principal, un selector de temperatura y un piloto indicador que avisa cuando el agua alcanza la temperatura deseada. Es como un baño maría. Por otro lado: - Reactivos Somogyi (preparado). - Reactivo Nelson (preparado). - Agua destilada. - Muestras problema.

Procedimiento
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