Determinacion De Proteinas

DETERMINACION DE PROTEINAS - MÉTODO DE KJELDAHL

1. FUNDAMENTO DEL METODO DE ANÁLISIS

1. Digestión
• La muestra se disuele en acido sulfúrico concentrado y se calienta con la finalidad de que:
• La materia carbonosa se libere en forma de CO2.
• Los minerales se sulfaten.
• El nitrógeno se transforme en sulfato de amonio.

Como catalizador se utiliza CuSO4, puede usarsesales de Hg, Zr, Se, pero estos dos últimos son muy caros y el Hg es toxico. El K2SO4 sirve como elevador de la temperatura de ebullición del acido sulfúrico, de 180°C hasta 400°C (no es catalizador), por cada 10°C de elevación de la temperatura la velocidad de reacción se duplica. El ataque finaliza cuando la solución se torna de un color verde esmeralda límpido. En este proceso de digestión oataque de la muestra , se libera en la digestión en forma de CO2 la grasa, fibra, carbohidratos, presentes en la muestra, la parte oxigenada de la proteína también se libera, solo queda la parte nitrogenda de la proteína. Al final del ataque se tiene en la solución H2SO4 sobrante, sales sulfatadas de los minerales disueltas y el sulfato de amonio.

N organico + H2SO4 → (NH4)SO4

2.Destilación
En el proceso de destilación, se añade al balón de Kjeldahl 500 ml de agua con la finalidad de:
Diluir al acido sulfúrico remanente
A la vez que el sulfato de potasio, sulfato de cobre y sulfato de amonio disueltos precipiten.
Dejando libre en la parte superior el H2SO4 sobrante, es decir hay formación de dos fases.
Luego se añaden algunas granallas de zinc con la finalidad de evitar laebullición tumultosa creando nucleos de vaporización. Inmediatamente después de este paso se adiciona la soda caustica por los bordes del balón, para evitar una reacción violenta con el acido sulfúrico remanente y el (NH4)SO4.
La adicion de la soda caustica neutraliza la acción del acido sulfúrico sobrante, y favorece la liberación de amoniaco en forma de NH4OH que será recibido en el frascoerlenmeyer que contiene la solución de acido borico. Inicialmente, al producirse el calentamiento desaperecen las dos fases, se forma una solución de color celeste oscuro, luego de ebullir se torna color marron debido a la presencia de un complejo cúprico, que desaparece a medida que se libera amoniaco. El amoniaco es captado por la solución de H3BO3 que forma un complejo estable, esto se observa debidoal cambio de color que experimenta la solución de acido borico, rojo a amarillo, producido por el amoniaco y que alcaliniza la solución progresivamente, a medida que es captado por el acido borico, esto es visible gracias al indicador rojo de metilo, pudiéndose usar otro indicador según el rango de viraje.

(NH4)SO4 + NaOH → NH3 + H3BO3 → NH4H2BO3 (borato de amonio)

3. TitulacionPosteriormente se determina por titulacion con HCl 0.1 N hasta el cambio de color, en este caso, amarillo a rojo grosella. Anotar el gasto de acido y proceder a los cálculos. Este método de análisis es aplicable a todo tipo de alimento en general.

NH4H2BO3 + HCl → NH4Cl + H3BO3

2. MATERIALES y REACTIVOS
2.1. Materiales
• Muestra alimenticia de cualquier tipo
2.2. Reactivos
• H2SO4concentrado
• Mezcla catalizadora (CuSO4 y K2SO4)
• H2SO4 0.02 N padronizado
• NaOH 50%
• H3BO3
• Indicador (rojo de metilo + verde de bromocresol)

3. PROCEDIMIENTO
3.1. Primera parte: digestión
• Acoplar el reóstato del bloque digestor verificando el voltaje correcto.
3.1.1. Muestras
• Pesar cerca de 0.2 gr sobre papel vegetal previamente pesado, colocarjuntamente con el papel de pesado en el tubo de digestión. Colocar 0.2 gr de CuSO4, 1.0 gr de K2SO4 y 5 ml de H2SO4 concentrado. Agitar cuidadosamente el tubo para mezclar la muestra (en caso de muestras con alto contenido de proteínas, el pesado deberá ser menor, cerca de 0.1 gr). Hacer un blanco.

|Muestra |Peso de harina (g) |
|1 |0,2069 |
|2...