determinacion proteinas

LABORATORIO DE BIOQUÍMICA N°3
DETERMINACION CUANTITATIVA DE PROTEÍNAS



METODOLOGIA


OBSERVACIONES, CALCULOS Y RESULTADOS
Tablas de resultados

Tabla 1. Absorbancia vs. Concentración(primera toma de datos)
Concentración
(ppm)
Medida absorbancia
1
Medida absorbancia 2
Medida absorbancia
3
Promedio absorbancias
Blanco (0)
0.000


0.000
20
0.013
0.013
0.0130.013
50
0.065
0.069
0.073
0.069
100
0.075
0.078
0.076
0.076
150
0.084
0.081
0,080
0.082
200
0.153
0.159
0.160
0.157
250
0.161
0.163
0.164
0.163


Figura 1. Absorbancia vs.Concentración

Para obtener las concentraciones de p1, p2, y p3 se tiene que:


Para p1 (muestra problema 1):


Para p2 (muestra problema 2):


Para p3 (muestra problema 3):ANALISIS DE RESULTADOS
Los polipéptidos absorben fuertemente en la región uv (200 a 400 nm) debido a que sus cadenas laterales aromáticas (las de Phe, Trp y Tyr) tienen coeficientes de extinciónmolar altos en esta región del espacio. Los polipéptidos no absorben luz visible, sin embargo si una proteína tiene un cromoforo que si absorbe, esta absorbancia se puede emplear para detectar supresencia en una muestra determinada [1]. Teniendo en cuenta esto, las medidas de absorbancia se registraron a 750 nm, ya que a esta longitud de onda el método de Lowry presenta mayor sensibilidad parauna concentración proteica baja [2], y a esta longitud de onda se lee el color ‘’azuloso’’ desarrollado en la solución. Los resultados de concentración obtenidos son cuestionables, ya que de acuerdo ala ley de Lambert-Beer la muestra problema p3 al tener 61 ppm, debería tener una mayor absorbancia que la de 50 ppm (tiene mayor absorbancia que p3). Lo mismo ocurre con la muestra problema p2 ya queal tener mayor concentración que la de 200 ppm, es la de 200 ppm la que presenta mayor absorbancia en comparación a la de 250. Sin embargo todas las absorbancias de las muestras problema se...