determinación de azúcares reductores

Grado en ciencia y tecnología de los alimentos
Asignatura: Biología

INFORME PRÁCTICA Nº 1: DETERMINACIÓN DE AZÚCARES REDUCTORES. METODO DE SOMOGYI-NELSON

Introducción:
En esta práctica nos vamos a centrar en el estudio de azucares reductores, es decir azúcares que poseen un grupo reductor y que pueden ser oxidados por agentes oxidantes relativamente suaves como el ión férrico ycúprico.
Fundamento teórico:
El estudio y determinación de estos azúcares reductores se realizará mediante el método colorimétrico de Somogyi-Nelson.
Este método se basa en la capacidad de estos azucares para reducir agentes oxidantes suaves y que en presencia de arsenomolibdato amónico crean un complejo de color azul el cual mediante un espectrofotómetro podemos conocer la concentración de cobrereducido y por tanto de azúcar reductor.
Materiales:
Reactivo de Somogyi I
Reactivo de Somogyi II
Reactivo de Nelson
Glucosa 500 ppm (Sol.A)
Tres muestras problema A B C
12 Tubos de ensayo de tapa roscada
Agua destilada
Agitador o vortex
Espectrofotómetro
Pipeta automática
Incubadora


Procedimiento:
Empezamos preparando 6 tubos con la solución de glucosa 500 ppm y aguadestilada, a estas muestras las llamaremos estándares.

El dato de la concentración de glucosa en estas muestras estándares nos viene dada en el protocolo experimental que nos dieron en clase lo cual nos va a servir para poder realizar la curva de calibrado.
Después preparamos otros 6 tubos por duplicado pero con las muestras problema A, B, C quedando A1.1, A1.2, B1.1, B1.2, C1.1, C1.2
Una vezhecho esto mezclamos los reactivos Somogyi (I) y Somogyi (II) en la proporción 4:1 (v/v). Necesitamos 24 ml de este reactivo (R1) pero para prevenir alguna perdida preparamos 30ml.
A continuación añadimos 2 ml de esta mezcla en cada tubo, los seis de la muestra estándar (A) y los seis con las muestra problema; agitamos todos los tubos en el vortex; en este punto de la práctica observamos como todaslas muestras cambian de color transparente a un azul verdoso lo cual es una característica de que hay presencia de azucares reductores, el único tubo que no presenta este cambio es el de agua destilada. A continuación incubamos todos los tubos durante 15 minutos en un baño de agua hirviendo.
Transcurridos los 15 minutos, enfriamos todos los tubos de ensayo y les añadimos 2 ml de reactivo deNelson (R2) y agua destilada. Por último, tras la agitación, se evaluamos la absorbancia de cada muestra en un espectrofotómetro a una longitud de onda de 540nm.
Cada una de las muestras se meten en 12 cubetas, la primera muestra que se mete en el espectrofotómetro es la muestra que no contiene glucosa para utilizarla como patrón (auto cero) y a continuación se procede a medir las absorbancias delresto de las muestras. Hay que tener en cuenta eliminar las burbujas de cada cubeta ya que si no se hace el resultado del espectrofotómetro no es exacto.

Resultados y conclusión:
Tras la observación de cada muestra en el espectrofotómetro obtenemos los siguientes resultados:
Muestras estándar







Muestras problema
PROBLEMA
ABS
A.1.1
0.14
A1.2
0.32
B2.1
0.55
B2.2
0.78C3.1
1.32
C3.2
1.37


Con los datos de las muestras estándar realizamos la grafica para poder obtener la ecuación que nos permitirá saber la concentración de glucosa en las muestras problema.

Los puntos representados en la gráfica indican la concentración de glucosa y la absorbancia de las diferentes muestras (estándares).
Según la ley de Lambert-Beer la absorbancia es directamenteproporcional a la concentración de la sustancia absorbente, por lo tanto cuanto mayor sea la concentración de glucosa, mayor ha de ser la absorbancia.
NOTA:
En este caso para realizar la gráfica he tenido que eliminar los datos de las muestras estándar 5 y 6 ya que se alejaban mucho de los otros e interferían en la interpretación general de la información.
A continuación en la ecuación obtenida...