Digestion
Páginas: 14 (3314 palabras)
Publicado: 2 de septiembre de 2011
DIGESTION DE PGLO.
oscar manuel salazar
Introducción.
Una de las herramientas básicas en la biotecnología moderna es el corte y ligamento de DNA en otra molécula de DNA. El concepto básico detrás del empalme del DNA, es remover un fragmento funcional –gen- de un organismo y combinar este con el DNA de otro organismo para estudiar como trabajan los genes. El resultado deseado en elempalme de un gen es que el organismo receptor exprese las instrucciones genéticas del gen que adquirió.
Enzimas de restricción.
Enzimas de restricción
Las bacterias pueden destruir a un DNA extraño o invasor procedente de otras especies, impidiendo su replicación, su transcripción o su incorporación al genoma de la célula huésped, ello es posible gracias a una ingeniosa combinación de dosprocesos enzimáticos denominados:
- modificación
- restricción
La modificación, es la alteración enzimática por la célula de su propio DNA, de un modo distintivo específico que la diferencia de las otras especies.
La restricción, es la acción de enzimas específicos que pueden degradar los DNA extraños invasores, pero que no destruyen el DNA de la célula huésped, simplemente a laalteración covalente específica de DNA de la célula huésped, inducida por los enzimas de la modificación, no permite la actuación sobre él de los enzimas de restricción.
Una enzima de restricción es una enzima que puede reconocer una secuencia característica de nucleótidos dentro de una molécula de ADN y cortar el ADN en ese punto en concreto llamado sitio o diana de restricción o en un sitio nomuy lejano a este, dependiendo de la enzima. Los sitios de restricción cuentan con entre 4 y 12 pares de bases, con las que son reconocidos.
El mecanismo de corte de DNA se realiza a través del rompimiento de 2 enlaces fosfodiester en la doble hebra, dando lugar a dos extremos de DNA, que pueden ser romos o Cohesivos/escalonados.
Los fragmentos de ADN obtenidos de este modo pueden unirsepor otras enzimas llamadas ligasas.
Las enzimas de restricción que a pesar de ser distintas y provenir de distintas especies, tienen la misma secuencia de reconocimiento y dejan el mismo extremo cohesivo, pero no cortan en el mismo sitio, son llamadas Isoesquizómeros.
Uno de los campos en los que el uso de Enzimas de Restricción ha tenido mayor implicancia ha sido el diagnóstico deemfermedades genéticas relacionadas a cambios en la secuencia del ADN, ya sean mutaciones puntuales, inserciones o deleciones de trozos.
En general existen 3 sistemas de enzimas de restricción
Tipo 1: Una sola enzima tiene actividad de restricción y modificación,. al reconocer la secuencia específica de DNA corta al azar en sitios distintos al sitio de reconocimiento, ya sea río arriba o río abajo. Elcorte deja extremos cohesivos. Necesitan de ATP para moverse en el DNA, desde el lugar de reconocimiento hasta el sitio de corte, además de SAM (S-adenosil-metionina) y Mg++ como cofactores.
Tipo 2: Solo tienen actividad de restricción, el corte es efectuado en el sitio de reconocimiento, o bien, ceca de él, por lo que el corte es resistente y predecible, por esta característica es que son muyutilizadas para la clonación de genes, ya que al cortar en sitios específicos se pueden recuperar secuencias conocidas. Sólo requieren Mg++ como cofactor, no necesitan de ATP.
Tipo 3: Se utiliza una enzima oligomérica que realiza todas las actividades enzimáticas, tienen función de restricción y modificación, cortan de 25 a 27 pares de bases lejos del sitio de reconocimiento, dejando extremoscohesivos. Requieren dos secuencias de reconocimiento en orientación opuesta en la misma cadena de DNA. Necesitan ATP, Mg++ y SAM (S-adenosil-metionina) como cofactores.
pGLO es un plásmido usado en biotecnología como vector. Se utiliza como marcador de seres modificados genéticamente. Como todo plasmido, pGLO tiene una estructura circular en la que se expresan diversos genes. Entre ellos...
oscar manuel salazar
Introducción.
Una de las herramientas básicas en la biotecnología moderna es el corte y ligamento de DNA en otra molécula de DNA. El concepto básico detrás del empalme del DNA, es remover un fragmento funcional –gen- de un organismo y combinar este con el DNA de otro organismo para estudiar como trabajan los genes. El resultado deseado en elempalme de un gen es que el organismo receptor exprese las instrucciones genéticas del gen que adquirió.
Enzimas de restricción.
Enzimas de restricción
Las bacterias pueden destruir a un DNA extraño o invasor procedente de otras especies, impidiendo su replicación, su transcripción o su incorporación al genoma de la célula huésped, ello es posible gracias a una ingeniosa combinación de dosprocesos enzimáticos denominados:
- modificación
- restricción
La modificación, es la alteración enzimática por la célula de su propio DNA, de un modo distintivo específico que la diferencia de las otras especies.
La restricción, es la acción de enzimas específicos que pueden degradar los DNA extraños invasores, pero que no destruyen el DNA de la célula huésped, simplemente a laalteración covalente específica de DNA de la célula huésped, inducida por los enzimas de la modificación, no permite la actuación sobre él de los enzimas de restricción.
Una enzima de restricción es una enzima que puede reconocer una secuencia característica de nucleótidos dentro de una molécula de ADN y cortar el ADN en ese punto en concreto llamado sitio o diana de restricción o en un sitio nomuy lejano a este, dependiendo de la enzima. Los sitios de restricción cuentan con entre 4 y 12 pares de bases, con las que son reconocidos.
El mecanismo de corte de DNA se realiza a través del rompimiento de 2 enlaces fosfodiester en la doble hebra, dando lugar a dos extremos de DNA, que pueden ser romos o Cohesivos/escalonados.
Los fragmentos de ADN obtenidos de este modo pueden unirsepor otras enzimas llamadas ligasas.
Las enzimas de restricción que a pesar de ser distintas y provenir de distintas especies, tienen la misma secuencia de reconocimiento y dejan el mismo extremo cohesivo, pero no cortan en el mismo sitio, son llamadas Isoesquizómeros.
Uno de los campos en los que el uso de Enzimas de Restricción ha tenido mayor implicancia ha sido el diagnóstico deemfermedades genéticas relacionadas a cambios en la secuencia del ADN, ya sean mutaciones puntuales, inserciones o deleciones de trozos.
En general existen 3 sistemas de enzimas de restricción
Tipo 1: Una sola enzima tiene actividad de restricción y modificación,. al reconocer la secuencia específica de DNA corta al azar en sitios distintos al sitio de reconocimiento, ya sea río arriba o río abajo. Elcorte deja extremos cohesivos. Necesitan de ATP para moverse en el DNA, desde el lugar de reconocimiento hasta el sitio de corte, además de SAM (S-adenosil-metionina) y Mg++ como cofactores.
Tipo 2: Solo tienen actividad de restricción, el corte es efectuado en el sitio de reconocimiento, o bien, ceca de él, por lo que el corte es resistente y predecible, por esta característica es que son muyutilizadas para la clonación de genes, ya que al cortar en sitios específicos se pueden recuperar secuencias conocidas. Sólo requieren Mg++ como cofactor, no necesitan de ATP.
Tipo 3: Se utiliza una enzima oligomérica que realiza todas las actividades enzimáticas, tienen función de restricción y modificación, cortan de 25 a 27 pares de bases lejos del sitio de reconocimiento, dejando extremoscohesivos. Requieren dos secuencias de reconocimiento en orientación opuesta en la misma cadena de DNA. Necesitan ATP, Mg++ y SAM (S-adenosil-metionina) como cofactores.
pGLO es un plásmido usado en biotecnología como vector. Se utiliza como marcador de seres modificados genéticamente. Como todo plasmido, pGLO tiene una estructura circular en la que se expresan diversos genes. Entre ellos...
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