Electroforesis

Electroforesis.
¿Qué es la electroforesis?
Es una técnica en la que se separan moléculas (proteínas o ácidos nucleícos) según la movilidad (que depende de la intensidad del campo aplicado, su carga y su peso molecular) en su campo eléctrico disueltas en algún fluido a través de una matriz porosa según la técnica que se emplee.

Existen 3 tipos de electroforesis:
1.- Electroforesis defrente móvil o libre

2.- Electroforesis de zona:
•   Electroforesis en papel

•   Electroforesis en gel
-Existe una gran variedad de tipos de electroforesis en gel, que se pueden agrupar en dos categorías:

a) Electroforesis en gel en una dimensión (continuo o discontinuo)

○ Electroforesis en geles de poliacrilamida (PAGE)
    ○ PAGE en condiciones desnaturalizante
    ○ PAGE encondiciones no desnaturalizantes
    ○ SDS – PAGE
○ Isoelectroenfoque
○ Electroforesis en campos pulsantes

b) Electroforesis en gel en dos dimensiones (bidimensional)

3.- Electroforesis capilar
•  Electroforesis capilar de zona (CZE)
•  Electroforesis capilar en gel (CGE)
•  Isotacoforesis capilar (CITP)
•  Isoelectroenfoque capilar (CIEF)
•  Cromatografía electrocinéticacapilar micelar (MEKC)

1.- Electroforesis de frente móvil o libre
La sustancia se introduce en un tubo disuelto en pH y fuerzas iónicas, se colocan electrones en diferentes brazos del dispositivo y se crea un campo eléctrico provocando que las moléculas de proteína cargada (que se desplazan a velocidades diferentes de acuerdo con sus cargas) emigren hacia los electrodos de polaridad opuesta.2.- Electroforesis de zona.
La muestra está obligada a desplazarse sobre un soporte sólido de papel, celulosa o gel.
•   Electroforesis en papel: La muestra se aplica sobre una tira de papel de filtro humedecido con una solución tampón (mezcla de acido débil y base, esto para mantener el pH estable) o bien en el centro o en cualquiera de los extremos del papel, dependiendo de las sustancias aseparar y del pH del tampón. Los extremos de la tira se sumergen en dos recipientes separados que contienen la disolución tampón y en los que se hallan colocados los electrodos. Se conectan los electrodos a una fuente de tención continua, al aplicar una corriente directa, las moléculas cargadas de la mezcla emigran hacia los electrodos de polaridad opuesta formando bandas en el papel. Igual lavelocidad depende de su carga.
•   Electroforesis en gel: se halla entre los métodos más convenientes empleados en la separación de macromoléculas, los geles de mayor uso son poliacrilamida y agarosa. Estos poseen poros que limitan la velocidad del traslado de moléculas durante el proceso electroforético.
a) Electroforesis en gel en una dimensión (continuo o discontinuo):
○ Electroforesis engeles de poliacrilamida (PAGE).- La poliacrilamida es un soporte empleado frecuentemente en electroforesis en gel. Forma, además, geles transparentes con estabilidad mecánica, insolubles en agua, relativamente no iónicos y que permiten buena visualización de las bandas durante tiempo prolongado. Además tiene la ventaja de que variando la concentración de polímeros, se puede modificar de maneracontrolada el tamaño del poro.
○ PAGE en condiciones no desnaturalizantes.- La muestra se carga directamente en el gel en el cual se va a producir la separación, por lo tanto, la concentración del gel es uniforme y hay un único tampón. Se desarrolla en condiciones donde no se altera la conformación de las proteínas separadas, así que, cuando finaliza la electroforesis pueden realizarse estudios condichas proteínas separadas.

○ PAGE en condiciones desnaturalizante.- Con algunos compuestos químicos, las proteínas pierden su estructura original, estos compuestos se llaman agentes desnaturalizantes, y
Producen el desplegamiento de la proteína que queda. Otros agentes serian la urea y algunos detergentes. La urea interfiere con las reacciones hidrofóbicas de las proteínas, los detergentes...