Electroforesis

Resumen
La extracción, cuantificación y purificación de proteínas de hígado de ratón fue el objetivo principal del siguiente trabajo. El mismo, se realizo en dos etapas diferentes, en la primer clase utilizaron técnicas tales como salting out, precipitación salina y el método de Lowry para la cuantificación mediante lectura en el espectrofotómetro; en la segunda etapa serealizó unaelectroforesis en gel de poliacrilamida. Gracias al análisis conjunto de losresultados arrojados por estas técnicas se pudo concluir que la mayor parte de las proteínas que se encuentran en el hígado de un ratón son aquellas que poseen un peso aproximado de 103,753 kDa y 41,495 kDa.

Introducción
Las proteínas son las moléculas orgánicas más abundantes en la célula, ellasconstituyen más del 50% del pesoseco de la célula. Cada tipo celular, tiene un rol específicodeterminado por su composición proteica. Con la posibilidad de que 20 (o 22) aminoácidosdiferentes puedan estar unidos en cualquier orden para conformar polipéptidos de cientos deaminoácidos, tienen el extraordinario potencial de producir una gran cantidad de variantes ensu conformación. Todas estas proteínas pueden ser aisladas para suestudio en el laboratorio,aunque los análisis bioquímicos requieren la disgregación de la delicada anatomía de la célula,se han desarrollado diferentes técnicas que permiten separar las macromoléculaspolipeptídicas de la inmensa cantidad de componentes celulares con los que interaccionan
invivo
.La elección del método de extracción de proteínas depende del estudio que se quiera llevar a cabo, yaque las diferentes técnicas preservan distintas características de las proteínas.Lo primero que se debe hacer es la elección del material biológico de partida y su disgregación(porque los componentes celulares se encuentran rodeados de tejido conectivo) a partir de enzimas o bien una ruptura mecánica grosera. Así, la suspensión de células queda reducida a una espesa sopa (extracto) que contieneuna gran diversidad de partículas unidas a membrana, cada una de un tamaño, una carga y una densidad característicos. A continuación se pueden separar los diferentes componentes de este homogenado mediante la centrifugación diferencial, donde los preparados de células rotas se exponen a altas velocidades de giro y los componentes celulares se separan en función de su tamaño y densidad. El método decentrifugación constituye el primer paso de la mayoría de fraccionamientos, pero sólo separalos componentes que son muy diferentes en tamaño y si lo que se quiere obtener son las proteínas, es útil realizar la técnica de precipitación salina donde se logra la precipitación de una fracción de las proteínas mediante el aumento de la fuerza iónica del medio. Mediante el agregado de sales (sulfato deamonio) se disminuye la interacción proteína-agua ya que sequita la capa de solvatación predominando la interacción proteína-proteína y generando laprecipitación de las mismas.Las proteínas suelen tener una carga neta positiva o negativa, como resultado de losaminoácidos cargados que contienen. Si se aplica un campo eléctrico a una solución quecontenga una molécula proteica, la proteína migrará auna velocidad que dependerá de sucarga neta, de su tamaño y de su forma. Esta técnica llamada electroforesis, es una de las másutilizadas para la purificación de proteínas, sobre todo la electroforesis en gel de poliacrilamidacon SDS (SDS-PAGE). Como matriz inerte a través de la cual migran las proteínas, se utilizaun gel de poliacrilamida con numerosos puentes cruzados y el tamaño del poro delgel puedeajustarse de forma que sea el adecuado para retrasar la migración de las moléculas proteicasde interés. Las proteínas no se colocan en una solución acuosa sencilla sino en una soluciónque contiene un potente detergente cargado negativamente, el dodecil sulfato sódico, o SDS.Puesto que este detergente se una a las regiones hidrofóbicas de las moléculas proteicas,haciendo que las cadenas...