ELISA

¿QUE ES ELISA?
ELISA (acrónimo del inglés Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay, Ensayo por inmunoabsorción ligado a enzimas) es una técnica de inmunoensayo en la cual un antígeno inmovilizado se detecta mediante un anticuerpo enlazado a una enzima capaz de generar un producto detectable como cambio de color o algún otro tipo; en ocasiones, con el fin de reducir los costos del ensayo, nosencontramos con que existe un anticuerpo primario que reconoce al antígeno y que a su vez es reconocido por un anticuerpo secundario que lleva enlazado la enzima anteriormente mencionada. La aparición de colorantes permite medir indirectamente mediante espectrofotometría el antígeno en la muestra.
Se usa en muchos laboratorios para determinar si un anticuerpo particular está presente en la muestra desangre de un paciente. Aunque el procedimiento es rutinario y sencillo, involucra a un gran número de variables, tales como seleción de reactivo, temperatura, medición de volumen y tiempo, que si no se ajustan correctamente puede afectar a los pasos sucesivos y al resultado de la prueba.
Los lectores ELISA fueron diseñados para pruebas de anticuerpos. Trabajan tan bien que las máquinas se hanadaptado a sus propósitos. Los investigadores los usan para el análisis de proteínas y enzimas. También se usa para la detección del HIV y la cuantificación de ácidos nucleicos.
Los lectores ELISA o lectores de micro placa hacen espectrofotometría; emiten luz en una longitud de onda y miden la cantidad de luz absorbida y reflejada por un objeto tal como una proteína. Un espectrofotómetro mide la luzultravioleta y visible. Además, los lectores pueden leer la fluorescencia y la luminiscencia. Las tinturas químicas fluorescentes o emiten un color o longitud de onda cuando se exponen a la luz. La cantidad de reflexión, absorción y la identidad del color se usan para medir la cantidad de sustancia.
Para usar un lector ELISA, la molécula debe estar dusuelta en solución. Un espectrofotómetro requiereentre 400 micro litros y cuatro mililitros, dependiendo del fabricante y modelo. Un lector de placa ELISA necesita de dos a 100 micro litros; los lectores de placa usan menos muestra par obtener un resultado. Los lectores de placa ELISA miden más muestras por unidad de tiempo. Un espectrofotómetro mide de una a seis muestras por vez. Típicamente, una placa ELISA mide 96 veces más.

APLICACIÓNDebido a que el ELISA se puede realizar ya sea para evaluar la presencia de antígeno o la presencia de anticuerpos en una muestra, que es una herramienta útil para determinar las concentraciones de anticuerpos en suero. También se ha encontrado aplicaciones en la industria alimentaria en la detección de posibles alérgenos de alimentos, como la leche, cacahuates, nueces, almendras y huevos. ELISAtambién se puede utilizar en la toxicología como una pantalla preliminar con rapidez, para ciertas clases de medicamentos.
El ELISA fue la primera prueba de detección ampliamente utilizado para el VIH debido a su alta sensibilidad. En un ELISA, suero de una persona se diluye 400 veces y se aplicó a una placa a la que están unidos los antígenos del VIH. Si los anticuerpos del VIH están presentes enel suero, que se pueden unir a estos antígenos del VIH. La placa se lava a continuación para eliminar todos los otros componentes del suero. Un "anticuerpo secundario" especialmente preparado - un anticuerpo que se une a otros anticuerpos - A continuación se aplica a la placa, seguido de otro lavado. Este anticuerpo secundario se une químicamente con antelación a una enzima.
Por lo tanto, laplaca contendrá enzima en proporción a la cantidad de anticuerpo secundario unido a la placa. Se aplica un sustrato para la enzima, y la catálisis por la enzima conduce a un cambio en el color o la fluorescencia. ELISA resultados se expresan como un número, el aspecto más controvertido de esta prueba es determinar el punto de "corte" entre un positivo y un resultado negativo.
Un punto de corte se...