Ensayo

UNIVERSIDAD DE CIENCIAS Y ARTES DE CHIAPAS
ESCUELA DE NUTRICIÓN

MANUAL DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO DE
“BASES MOLECULARES DE LA BIOQUIMICA”

CURSO II

ELABORÓ:
M.C. Rosa Márquez Montes

Tuxtla Gutiérrez, Chiapas; Julio 2010

UNIVERSIDAD DE CIENCIAS Y ARTES DE CHIAPAS

ESCUELA DE NUTRICIÓN

MATERIA: Bases moleculares de la bioquímica UNIDAD: I

PRÁCTICA: 1. NOMBRE DEPRÁCTICA: Pruebas de identificación de los carbohidratos

OBJETIVOS:
← Identificar los carbohidratos por medio de reacciones coloridas.
← Diferenciar el azúcar reductor del azúcar invertido.
← Conocer las reacciones que identifican a los carbohidratos.

MATERIAL:
Tubos de ensayo de 13 x 100 mm
Vaso de precipitado de 250 mL
Pipetas graduadas de 5 y 10 mL
Pinzas para tubos de ensayo
Gradillapara tubos de ensayo
Parrilla

REACTIVOS:
Soluciones de prueba:
Glucosa al 5%
Fructosa al 5%
Sacarosa al 5%
Lactosa al 5%
Ribosa al 5 % (u otra pentosa existente en el laboratorio)
Almidón al 15%
Muestra problema (jugo natural de una fruta (limón y naranja), albúmina de huevo “clara”) diluida al 5 %

Reactivo de Molish: α-naftol al 1% en etanol, 0.1g de α-naftol en 10 mL de etanol.Reactivo de Benedict: Pesar 17.3 g de citrato de sodio, 9 g de carbonato de sodio, y 17.3 g de sulfato de cobre pentahidratado (CuSO4.5H2O) Mezclarlo bien, disolver en agua y completar a 100 mL en un matraz aforado.
Reactivo de Barfoed: Disolver 13.3 g de acetato de cobre en 200 mL de agua destilada, aproximadamente y agregue 1.8 mL de ácido acético glacial.
Reactivo de Bial: Disolver 1 gde orcinol en 100 mL de HCI concentrado, agregar a esta disolución 0.025 g de FeCl3 disueltos en 2.5 mL de agua destilada. Guardar en frasco ámbar.
Reactivo de Seliwanoff: Disolver 0.35g e resorcinol en 50 mL de HCI concentrado, agregar agitando 50 mL en agua destilada. Guardar en frasco ámbar. Prepararlo antes de usarlo.

PROCEDIMIENTO:
Fundamento de la reacción:

A. Pruebas generalespara los carbohidratos
← Reacción de Molish: Los carbohidratos al estar en contacto con un ácido concentrado se deshidratan, dando un derivado de tipo furfural. Este a su vez se condensa con el α-naftol y en la superficie de separación entre los dos líquidos ( o sea en la interfase) se observa un color púrpura o violeta.

B. Pruebas de los azúcares reductores
← Reacción de Benedict: Losazúcares reductores en presencia de un medio alcalino y con temperatura elevada facilita las reacciones de oxidación y puede reaccionar con distintos agentes oxidantes, en este caso CuSO4.5H2O al que reduce de Cu2+ a Cu1+,en esta mezcla alcalina el ion citrato forma un complejo soluble con el Cu2+ y el azúcar se oxida. Un resultado positivo se traduce por aparición de un precipitado amarillo, verde orojo.
← Reacción de Barfoed: Los azúcares reductores en presencia de un medio ácido y con temperatura elevada facilita las reacciones de oxidación y puede reaccionar con distintos agentes oxidantes, en este caso (CH3COO)2Cu al que reduce de Cu2+ a Cu1+,en esta mezcla ácida el ion acetato forma un complejo soluble con el Cu2+ y el azúcar se oxida. Un resultado positivo se traduce por aparición deun color rojo ladrillo.

C: Pruebas para carbohidratos individuales
← Reacción de Bial: Se utiliza para la identificación de pentosas, pero las hexosas también producen cierta coloración. Es una reacción de condensación de los carbohidratos por deshidratación con ácidos, formando compuestos intermedios como el furfural (en pentosas) o hidroximetilfurfural (en hexosas) que al reaccionar con elorcinol forman compuestos de condensación de color verde azulado o verde oliva (con las pentosas) o de color amarillo a pardo (con las hexosas).
← Reacción de Seliwanoff: Se utiliza para la identificación de cetosas. Es una reacción de condensación de los carbohidratos por deshidratación con ácidos, formando compuestos intermedios como el hidroximetilfurfural que al reaccionar con el...