Enterobacterias

AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN BIOQUIMICA DE LA FAMILIA ENTEROBACTERIACEAE

M en C. Jeiry Toribio Jiménez

Chilpancingo, Gro. Agosto de 2006

Características de las Enterobacteriaceae
Bacilos gramnegativos, Son móviles (excepto Klebsiella y Shigella), No forman esporas Algunas cepas de Enterobacter, Klebsiella y E. coli presentan cápsula. Sus colonias suelen ser blancas o grisáceas enmedios sin indicadores, Miden aprox. de 2 a 6 mm de diámetro, No hemolíticas, Morfología colonial: convexas, circulares y lisas, de bordes regulares y aspecto húmedo. Fermentadores de glucosa con liberación de ácidos, o de ácido y gas, Oxidasa negativos Reducen los nitratos a nitritos y catalasas (+).

La identificación convencional de las bacterias se basa en las siguientes pruebas: Morfologíamicroscópica: coco, bacilo, espíral ó pleomórfica Tinción: Gram positiva o Gram negativa, ácido alcohol resistente Formadoras o no de esporas Requerimientos de oxígeno: aeróbico, anaeróbico y facultativo Características del cultivo, condiciones de incubación y morfología colonial Propiedades antigénicas Reacciones bioquímicas Contenido de G+C, secuencia genética ribosomal, secuencia total de sugenoma.

TÉCNICA DE AISLAMIENTO, DILUCIÓN POR ESTRÍA CRUZADA

Colonias no aisladas

Colonias aisladas

Morfología microscópica
Preparar el frotis bacteriano Teñir con cristal violeta 1 minuto Lavar con agua el exceso de colorante cubrir con lugol 1 minuto lavar con agua el exceso de lugol Decolorar con alcohol-acetona Lavar con agua el resto del disolvente Teñir con safranina 1 minuto Lavarcon agua el exceso de colorante Secar la preparación Observar al microscopio 100X

Tinción GRAM: Bacterias gramnegativas
Cocos Gram-negativos:
1. Diplococos: forma usual de Neisseria sp, como N. meningitidis. También Moraxella sp y Acinetobacter sp aparecen con morfología de diplococos. Acinetobacter puede ser pleomórfico, y a veces aparece como coco Gram-positivo.

2. Cocobacilos: formausual de Acinetobacter sp, que puede ser Gram-positivo o Gramnegativo, y, a menudo, Gram-variable.

Bacilos Gram-negativo:
1. Bacilos finos: forma usual de enterobacterias como E. coli

2. Cocobacilos: forma usual de Haemophilus sp, como H. influenzae.

3. Curvados: forma usual de Vibrio sp, como V. cholerae y Campylobacter sp, como C. jejuni.

MORFOLOGÍA MACROSCÓPICA
La identificacióncolonial de los diferentes microorganismos se realiza sobre la superficie del agar, aquí las especies forman colonias con una forma y aspecto característico.

Términos utilizados para la identificación colonial
Tamaño: Diámetro en mm. Forma: Puntiforme, circular, filamentosa, irregular, rizoide, fusiforme. Elevación: Plana, elevada, convexa, pulvinada, embonada, umbilicada. Margen: Entero,ondulado, lobulado, erosionado o lacerado, filamentoso, rizado. Color: Blanco, amarillo, negro, marrón, anaranjado, beige, otros. Superficie: Brillante, opaca. Densidad: Opaca, translucida, transparente, etc. Consistencia: Mantecosa, viscosa, butirosa, seca, membranosa, quebradiza, etc.

Identificación colonial

Enterobacter cloacae en agar MacConkey

Shigella spp, en agar SS

Escherichiacol, agar MacConkey

Serratia marcescens, agar MacConkey

Proteus vulgaris, agar enterico Henktoen

Salmonella spp, agar MacConkey

Tabla 1. Tipos de medios de cultivo para la recuperación de las enterobacterias
MEDIO
MacConkey

TIPO
S, D

PROPÓSITO
Agar selectivo para el aislamiento de Salmonellas Shigellas y bacterias coliformes. La adición al agar de sales biliares y cristalvioleta inhibe el crecimiento de bacterias Gram+. La lactosa y el rojo neutro como indicador proveen la identificación entre cepas fermentadoras y no de la lactosa: E.coli -colonias rojas y medio rojo.,Salmonellas, colonias incoloras y medio amarillo
Shigellas, colonia incolora y medio amarillo.

EMB

S, D

Medio ligeramente selectivo para el aislamiento y diferenciación de enterobacterias....