Enzimología i

Enzimología I

Integrantes: Aracelli Gómez
Ruth Miranda
Macarena TapiaSección: 2.1
Carrera: Medicina Veterinaria
Profesor: Fernando Valiente
Ayudante: TomásSoto
Fecha: 17/05/10
Introducción
Las enzimas son biomoléculas, principalmente proteínas, que se encargan de catalizar reacciones, aumentando su velocidad y sin intervenir en el equilibrio de esta. La actividad de la enzima depende de su integridad proteica, por lo que su función está dada por la estructuraproteica que tiene. La función principal de una enzima es la de catalizar reacciones, permitiendo que ocurran a una velocidad compatible con la vida. “La enzima proporciona el ambiente específico para que la reacción sea favorable energéticamente” [1]. Básicamente, las enzimas disminuyen la energía de activación, concepto que conocemos como la energía necesaria para superar la barrera energética entresustratos y productos.
Diversos factores influyen en la actividad enzimática, entre otros destacan el pH y la temperatura. Si se sabe que los grupos R de los aminoácidos son los encargados de unir ambos sectores mediante interacciones débiles covalentes, a cambiar el pH de la enzima se modifica el estado de ionización, por lo que la enzima con el sustrato ya no son afines, sino que se repelen, yes por esto que “las cadenas laterales ionizadas de la proteína pueden jugar un papel esencial en las interacciones que mantiene la estructura de la proteína”. Por otro lado, si la enzima se encuentra en una temperatura menor a la óptima, la energía cinética del sistema es menor y por lo tanto la catálisis es más lenta, por el contrario, si la temperatura sobrepasa a la que puede tolerar la enzima,ésta se desnaturaliza, rompiendo sus puentes de hidrógeno, perdiendo su estructura y, por lo tanto, su función.
“El reconocimiento de almidón se puede determinar mediante técnicas yodimétricas, las cuales proporcionan un intenso color azul que se forma por el complejo entre el almidón y el yodo. Sin duda uno de los reactivos más utilizados en esta situación es el lugol, el cual es una mezcla deyodo diatómico y yoduro de potasio. Se cree que en esta reacción el yodo es atrapado como un complejo de absorción en el interior de la cadena helicoidal de β-amilosa, componente macromolecular de muchos almidones” [2].
Materiales y Métodos
En primera instancia se mezcló 40 ml de NaCl 0.9% p/v con amilasa salival proporcionada por un integrante del grupo para la preparación enzimática. Luego sefiltró la solución utilizando embudo y una porción de algodón. Posterior a esto se prepararon 5 tubos de ensayo sometidos a una incubación de 37ºC en un baño termorregulado (modelo) durante 10 minutos para finalmente agregar 1 gota de lugol y observar la reacción.
En la segunda actividad se procedió a preparar 3 tubos de ensayo, a cada uno de ellos se le agregó 1ml NaCl 0.9% p/v, 2ml de almidón,buffer 1M de diferentes pH: 5,7 y 9 respectivamente y 2ml de enzima amilasa. Posteriormente se incubó a 37ºC por 10 minutos, cumplido el tiempo se agregó una gota de lugol a cada tubo.
En la tercera actividad se prepararon 5 tubos de ensayo, a cada uno de ellos se le agregó 1ml NaCl 0.9% p/v, 2ml de almidón, buffer 1M pH 7 y 2ml de enzima amilasa. Luego cada tubo se incubó durante 10 minutos,...