Enzimologia

Introduccion

Las enzimas son moléculas de naturaleza proteica que catalizan reacciones químicas, siempre que sean termodinámicamente posibles: Una enzima hace que una reacción química que es energéticamente posible pero que transcurre a una velocidad muy baja, sea cinéticamente favorable, es decir, transcurra a mayor velocidad que sin la presencia de la enzima. Cada célula y cada tejido tienensu actividad propia, lo que comporta continuos cambios en su estado bioquímico, en la base de la cual están las enzimas, que tienen el poder de catalizar, facilitar, y agilizar determinados procesos sintéticos y analíticos. Existen dos factores que alteran o modifican la actividad enzimática: la temperatura y el pH. Las enzimas poseen un pH característico donde su actividad es máxima: por encimao debajo de ese pH la actividad disminuye. La relación pH - actividad enzimática, constituye un factor de regulación intracelular de la actividad enzimática.
La velocidad de las reacciones enzimáticas aumenta por lo general con la temperatura, dentro del intervalo en que la enzima es estable y activa. La velocidad por lo general se duplica por cada 10 C° de aumento de temperatura. Sin embargolas enzimas se desnaturalizan cuando la elevación de la temperatura sobrepasa cierta temperatura límite. La cual a su vez es la temperatura óptima de trabajo. A bajas temperaturas, las reacciones disminuyen mucho o se detienen, pero la acción catalítica reaparece cuando la temperatura se eleva a valores normales.
Debido también a su naturaleza proteica la enzima presenta numerosos gruposionizables, los que derivan de los radicales de sus aminoácidos constituyentes. Las alteraciones del pH pueden cambiar el grado de ionización de los grupos químicos involucrados en el sitio activo de la enzima, afectando su actividad catalítica.

Objetivos:
* Realizar procedimientos de laboratorio para manipular muestras biológicas con enzimas.
* Comprobar el efecto que tiene en la actividad deuna enzima y las variaciones de pH y temperatura.
* Estudiar el efecto de las variaciones de pH y temperatura sobre la actividad de la amilasa salival.

Resultados
1-. Efecto de la temperatura sobre la hidrólisis enzimática del almidón

Tubos | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
NaCl 0.9% p/v | 1ml | 1ml | 1ml | 1ml | 3ml |
Tampón fosfato pH 7.0 | 1ml | 1ml | 1ml | 1ml | 1ml |Almidón 1% p/v | 2ml | 2ml | 2ml | 2ml | 2ml |
Preparación enzimática | 2ml | 2ml | 2ml | 2ml | - |
Incubar a : | 0°C | 100°C | 25°C | 37°C | 37°C |
Observación: El cuadro que a continuación damos a conocer, se realizo respecto a la presencia de almidón en cada tubo.
Tubos | Tubo 1 | Tubo 2 | Tubo 3 | Tubo 4 | Tubo 5 |
Positivo | * | * | | | * |
Negativo | | | * | *| |

2-.Efecto del pH sobre la actividad de la amilasa salival
Tubos | 1 | 2 | 3 | 4 |
NaCl 0.9% p/v | 1ml | 1ml | 1ml | 3ml |
Tampón fosfato (1ml) | pH5 | pH7 | pH9 | pH9 |
Almidón 1% p/v | 2ml | 2ml | 2ml | 2ml |
Preparación enzimática | 2ml | 2ml | 2ml | - |

Observación: La tabla a que a continuación mostraremos, se realizó según la presencia e almidónen cada tubo.
Tubos | Tubo1 | Tubo 2 | Tubo 3 | Tubo 4 |
Positivo | | | | |
Negativo | | | | |

Metodología
1-. Efecto de la temperatura sobre la hidrólisis enzimática
Se rotularon 5 tubos de ensayos en los cuales se deposito la cantidad indicada en el cuadro de distintas soluciones, estas son las siguientes: NaCl 0,9% p/v, Tampón Fosfato pH 7.0, Almidón 1% p/v, Preparaciónenzimática. El cuadro que nos entrego las cantidades que se agregaron a los tubos es el siguiente:

Tubos | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
NaCl 0.9% p/v | 1ml | 1ml | 1ml | 1ml | 3ml |
Tampón fosfato pH 7.0 | 1ml | 1ml | 1ml | 1ml | 1ml |
Almidón 1% p/v | 2ml | 2ml | 2ml | 2ml | 2ml |
Preparación enzimática | 2ml | 2ml | 2ml | 2ml | - |
Incubar a : | 0°C | 100°C |...