Enzimologia

Enzimología Clínica
(Tema 17)

Enzimología Clínica.T-17 Enzimologí Clí nica.T1. Los enzimas como catalizadores. • Estructura y naturaleza de los enzimas • Comportamiento cinético de los enzimas 2.- Medida de la actividad enzimática. 2.enzimá • Fundamento. • Factores que modifican la actividad enzimática. • Medida de la actividad enzimática de muestras clínicas • Instrumentación. Optimizaciónde las condiciones de medida. • Sistemas acoplados. 3.- Los enzimas como marcadores de lesión tisular. 3.lesió • Enzimas como marcadores de daño celular • Distribución tisular de los enzimas • Patrón isoenzimático. 4.- Enzimas séricos de importancia diagnóstica clínica. 4.sé diagnó clí • Transaminasas (ALT, AST) • α−Amilasa • Creatín fosfoquinasa (CPK) • Fosfatasa ácida (ACP) • Fosfatasa alcalina(ALP) • Gama glutamil transpeptidasa (GGT) • Láctico deshidrogenasa (LDH) • 5’-nucleotidasa (NTP)

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1. Los enzimas como catalizadores.
• Naturaleza proteica de los enzimas

1. Los enzimas como catalizadores.
El que una reacción discurra más o menos aprisa está en función no solo del estado energético de los compuestos antes y después sino también del propio mecanismo de la reacción.Durante el curso de la reacción es necesaria la formación de intermedios reactivos cuyo nivel energético es superior a la energía media de las moléculas de los reactivos, lo que en la práctica hace que la formación de esos intermediarios suponga una barrera energética que impide que la reacción avance. Cuanto mayor es el nivel energético de los intermedios reactivos tanto menor es la velocidad.

21.2 Velocidad de una reacción reacció La velocidad de una reacción (S → P) se define como: v= -d[S]/dt = d[P]/dt
S→P
Δ [S] ΔT

Δ [P] ΔT

1.3 El Comportamiento cinético de las ciné reacciones catalizadas por enzimas

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1.4 Velocidad de una reacción catalizada por un enzima. reacció
La velocidad de una reacción catalizada por un enzima con cinética enzimática michaeliana esproporcional a la concentración de substrato, pero es saturable y alcanza un máximo.
Reacción no enzimática

“Actividad“ y “cantidad” de un enzima en una muestra. Actividad“ cantidad”
• Actividad de un enzima: moles transformados por unidad de tiempo. Se expresa en Unidades Internacionales (μmoles transformados/seg). • Actividad específica de un enzima: actividad enzimática por masa de enzima(μmoles/seg/mg proteína) • Concentración: cantidad de enzima por unidad de volumen, o en su defecto cantidad de actividad enzimática por unidad de volumen

En bioquímica clínica se recurre a expresar la cantidad de enzima de una muestra en forma de Unidades de actividad enzimática por ml. enzimá ml.

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2.- La medida de la cantidad de un enzima en una muestra. 2.-

• Fundamento. • Optimización delas condiciones de medida. • Medida de la actividad enzimática de muestras clínicas • Instrumentación. • Sistemas acoplados

2.1 Medida de la “cantidad” de enzima presente en una muestra: cantidad”

Medida de la cantidad de enzima (proteína) presente en la muestra. Se utilizan métodos inmunológicos Medida de la actividad catalítica correspondiente al enzima presente en la muestra. Se utilizanmétodos espectrofotométricos

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2.1 Medida de la actividad enzimática. enzimá
S→P

La velocidad de una reacción se puede expresar bien como moles de substrato consumidos, o bien como moles de producto formado por unidad de tiempo: v= Δ [S]/ Δ T = Δ [P]/Δ T La formación de producto o desaparición del compuesto de partida puede monitorizarse espectrofotométricamente midiendo cambios en laabsorción óptica de la solución que contiene los substratos y el enzima

Δ [S] ΔT

Δ [P] ΔT

Color
Tiempo

1 Unidad de actividad enzimática se define enzimá como aquella cantidad de enzima capaz de transformar 1 μmol de substrato por minuto. minuto

2.2 Medida de la actividad enzimática... enzimá
Las condiciones experimentales para la medida de la actividad enzimática deben ser tales...