Espectrometria De Masas

Espectrometría de Masas

Instituto de Biotecnología
UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO

MAESTRÍA

EN

CIENCIAS

BIOQUÍMICAS

CURSO DE MÉTODOS

ESPECTROMETRÍA DE MASAS

PRESENTA: GERMÁN PLASCENCIA VILLA

JUNIO DE 2003 CUERNAVACA, MORELOS
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Espectrometría de Masas

Espectrometría de Masas
INDICE
INDICE INTRODUCCIÓN HISTORIA DE LA ESPECTROMETRIA DE MASAS ELESPECTRÓMETRO DE MASAS ENTRADA DE LA MUESTRA MÉTODOS DE IONIZACIÓN Impacto Electrónico (Electron Impact EI) Ionización Química (Chemical Ionization CI) Ionización de Campo (Field Ionization FI) Desorción de Campo (Field Desorption FD) Bombardeo con Átomos Rápidos (Fast Atom Bombardment FAB) Ionización por Electrospray (Electrospray Ionization ESI) Matrix-Assited Laser Desorption/Ionization (MALDI)ANALIZADORES DE MASAS Efecto de campos magnéticos sobre los iones Principios de los analizadores de masas Espectrómetro de masas de sector magnético (Magnetic Sector Mass Spectrometer) Espectrómetros de masas de cuadrupolo (quadrupole) Analizador de Tiempo de Vuelo (Time-of-flight TOF) Analizadores de trampa de iones (Ion-Trap) Analizador FT-ICR (Fourier Transform Ion Cyclotron Resonance) DETECTORES DEIONES Copa Faraday Multiplicador de Electrones (Electron Multiplier) Detector Daly Detector de Microcanales ADQUISICIÓN Y PROCESAMIENTO DE DATOS Procesamiento de Datos APLICACIONES Análisis de estructura y masa Sistemas acoplados Análisis cuantitativos Análisis de péptidos Iones de péptidos Secuenciación de péptidos Identificación de proteínas HERRAMIENTAS PARA ANÁLISIS DE PROTEÍNAS PORESPECTROMETRÍA DE MASAS DEFINICIÓN DE TÉRMINOS REFERENCIAS 2 3 4 6 8 9 9 10 11 11 13 14 16 19 19 19 20 21 22 24 25 27 27 27 28 29 30 31 32 32 33 34 35 36 36 37 38 39 40

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INTRODUCCIÓN
La Espectrometría de Masas es una poderosa técnica microanalítica usada para identificar compuestos desconocidos, para cuantificar compuestos conocidos, y para elucidar la estructura ypropiedades químicas de moléculas. La detección de compuestos puede ser llevada a cabo con cantidades realmente pequeñas (algunos pmoles) de muestra y obtener información característica como el peso y algunas veces la estructura del analito. En todos los casos, alguna forma de energía es transferida a las moléculas a analizar para afectar la ionización. En la técnica clásica de impacto electrónico (electronionization EI), algunas de las moléculas ionizadas del analito “explotan” en una variedad de fragmentos ionizados, el patrón de fragmentación resultante así como los iones residuales constituyen el espectro de masas. En principio, el espectro de masas de cada compuesto es único y puede ser usado como se “huella química” para caracterizar el analito. El proceso de análisis por espectrometría demasas comienza en llevar el compuesto a analizar a fase gaseosa, -2 la muestra debe tener una presión de vapor de que 10 mmHg, debido a que las moléculas deben migrar por difusión desde el sistema de entrada hacia la cámara de ionización. Las muestras pueden ser introducidas al espectrómetro de masas usando una sonda directa o por entrada en lote (batch) para sólidos puros o líquidos volátiles.Analitos purificados por diferentes técnicas de separación (cromatografía de gases, cromatografía de líquidos, electroforesis capilar, etc.) pueden entrar al espectrómetro de masas tan pronto como vayan saliendo. Ya que las moléculas neutras difunden en forma aleatoria por la fuente de ionización, solo una porción es ionizada. El proceso de ionización más común en análisis en fase gaseosa es el deionización electrónica (EI), en el cual se transfiere energía a la molécula neutra en estado de vapor, dándole suficiente energía para expulsar uno de sus electrones y de ese modo tener una carga residual positiva. Este proceso produce un ion con carga positiva y un electrón suelto. La molécula ionizada puede tener energía excesiva que puede ser disipada a través de la fragmentación de ciertos...