Estudiante

UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS
“Universidad del Perú, DECANA DE AMÉRICA”
Facultad de Ciencias Biológicas
E.A.P Genética y Biotecnología




GENÉTICA MOLECULAR
PROFESORA: GIOVANNA SOTIL

INFORME DE PRÁCTICA – EXTRACCIÓN DE DNA, RNA Y ELECTROFORESIS

ALUMNOS: MÁRQUEZ PALACIOS, MARÍA JIMENA 10100026gimeniux2005@gmail.com
MORALES VICENTE DAVID ABRAHAM 10100070
damvyt@gmail.com
LIMA – PERÚ
2012
Extracción y Análisis de pureza y calidad de Ácidos Nucleicos en Pejerrey, Caballa y Tilapia
María J.Márquez Palacios, David A. Morales Vicente


Resumen
Se realizó la extracción de DNA por el método de solventes orgánicos a partir de muestras frescas y fijadas de pejerrey, y enlatadas de caballa siguiendo el protocolo descrito por Doyle y Doyle(1987). Así mismo, se extrajo el RNA de muestras de tilapia fresca siguiendo el protocolo descrito por Chomczynski & Sacchi (1987). Se evaluó la eficaciadel proceso por cuantificación DNA y RNA mediante espectofotometría; y la calidad de los mismos mediante electroforesis en gel de agarosa 1% y buffer TBE 1X. Se procesaron en total 24 muestras de DNA y 23 de RNA. Obteniéndose 6 buenas extracciones de DNA, 3 de pejerrey fresco y 3 de pejerrey fijado; además de buenas extracciones de RNA.
Palabras clave: Extracción DNA, extracción RNA,espectofotometría, electroforesis, solventes orgánicos.



Introducción
Desde el siglo 19, un gran número de bioquímicos aislaron tanto DNA como RNA de los núcleos de las células. En 1869 Friedrich Miescher (1844-1895) extrajo una sustancia que llamó nucleína de esperma de salmón y que hoy conocemos con DNA.

Al día de hoy el estudio de los ácidos nucleicos es de suma importancia para eldesarrollo de una gran gama de disciplinas, que van desde estudio de la bioquímica del DNA y RNA hasta la investigación en nanotecnología. Para llevar a cabo una buena investigación en relación a los ácidos nuecleicos es de gran importancia una extracción de gran calidad y pureza que permitan obtener resultados que se encuentren acorde con lo en realidad sucede en el trabajo en investigación. Sepuede encontrar un gran número de protocolos de extracciones tanto de DNA como de RNA basados todos en la propiedad físico-químicas de los dos tipos de ácidos nucleicos como de los reactivos implicados en el aislamiento; sin embargo es necesaria la utilización del correcto método y es por ello que antes de iniciar una investigación es de suma importancia someter a evaluación el método en uso.
En elpresente trabajo analizamos a través de cuantificación con espectrofotómetro y calidad en electroforesis en gel de agarosa 2 protocolos, uno de DNA para muestras frescas, en alcohol y enlatadas y otra de RNA empleando Trizo®.
Materiales y métodos
Extracción de DNA con solventes orgánicos
Se realizó la extracción de DNA de tres muestras de peces: pejerrey en fresco, pejerrey fijado en alcoholy caballa enlatada. Para la preparación de la muestra se pesaron entre 20 y 70mg (ver tabla 1) de tejido utilizando materiales muy limpios para evitar la contaminación de la muestra. Esta se coloco en tubos de microcentrífuga nuevos donde se colocó luego 300μl de buffer lisis, el cual contiene CTAB, Tris – EDTA (Buffer TE), NaCl, agua y se encuentra a pH 8. Se homogeniza la muestra con un émbolode plástico esteril hasta conseguir una lámina delgada del tejido. Se incubó la muestra a 60°C por más de 30min. Se agregó a la muestra 600 μl de cloroformo:alcohol isoamílico en proporción 24:1, se invirtió el tubo varias veces por 5 minutos. Centrifugamos a 10000 rpm por 5 minutos a 4°C. De las tres fases obtenidas se extraen 200 μl de la fase superior acuosa y la colocamos en un tubo de...