estudiante

UNIVERSIDAD TÉCNICA DE AMBATO
FACULTAD DE CIENCIA E INGENIERÍA EN ALIMENTOS
LABORATORIO DE BIOQUÍMICA I
Profesor: Ing. Carlos Moreno
Ayudante: Egda. María Fernanda Garcés Práctica: N.- 7
Curso: Quinto “U” Bioquímica Fecha: 28 de Octubre del 2013
TEMA: “IDENTIFICACIÓN DE AMINOÁCIDOS”
1. INTRODUCCIÓN:
Los aminoácidos (AA) son moléculasorgánicas que contienen un grupo carboxilo (-COOH) y un grupo amino (-NH2) libres. En la naturaleza, se encuentran libres o formando parte de las proteínas (poliaminácidos), a partir de las cuales podemos obtenerlos por hidrólisis. Los AA comúnmente encontrados en las proteínas son 20. Difieren entre sí en sus cadenas laterales que varían en su estructura, tamaño y carga eléctrica que influyen ensu solubilidad en agua. Los AA se pueden clasificar según su grupo R en apolares alifáticos (Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Pro, Met), aromáticos (Phe, Tyr y Trp), polares sin carga (Ser, Tre, Cys, Asp y Gln), básicos (Lys, Arg e His) y ácidos (Asp y Glu ).
Cuando existe presencia de α-aminoácidos en una solución, la ninhidrina nos permite reconocerlos o detectarlos. Al añadir unas gotas de soluciónalcohólica de ninhidrina (hidrato de tricetohidrindeno) al 0.1-0,25% se produce una coloración violeta. También podemos reconocer los AA en solución alcohólica o acuosa, utilizando tricloruro férrico, con el cual el color de la solución es rojizo. Adicionalmente los distintos aminoácidos se pueden detectar mediante diferentes pruebas. Por ejemplo:
• Para los Aminoácidos Aromáticos, podemos utilizarácido nítrico (HNO3), que produce derivados nitrados (reacción Xantoproteica).
• Para aminoácidos azufrados en medio alcalino, usamos sales del plomo, las cuales forman un precipitado negro de PbS.
• En aminoácidos con grupo indólico (Trp), el p-dimetilaminobenzaldehído o el ácido glioxílico produce compuestos coloreados.
• Y para los AA fenólicos, el nitrato mercúrico-mercurioso del reactivode Millón da coloración rojo salmón.
2. OBJETIVO:
Identificar aminoácidos por medio de distintas pruebas.
3. MATERIALES Y REACTIVOS:
- Aminoácidos
- Albúmina de huevo
- Ninhidrina.
- Etanol al 95%
- HCl concentrado
- Nitrito sódico (5%)
- NaOH (40%)
- Acetato de plomo (2M)
- NaOH (2M)
- α-naftol (0.02% en etanol. Mantener en botella ámbar).
- hielo
- Hipocloritosódico alcalina (solución al 2%: en NaOH al 5%) Mantener en botella ámbar
- Urea (solución al 40%)
- HNO3 (conc. que contenga ácido glioxílico)
- H2SO4(concentrado)
- Guantes
- Tubos de ensayo y gradilla.
- Plancha eléctrica de calentamiento.
- Baño maría.
- Pipetas.
- Mechero
4. PROCEDIMIENTO:
Soluciones de AA
- Preparar una solución madre de los AA al 0.5% en HCl 0.2M (laconcentración está sujeta a verificación durante la práctica). De estas soluciones de AA, hacer las diluciones correspondientes dependiendo de la determinación a realizar. De los demás reactivos preparar entre 10 y 25 ml.
- Exponer el ácido acético a la luz solar.
Reconocimiento de los Alfa Aminoácidos
a) Con ninhidrina
- Preparación de la solución de ninhidrina (25 ml): En un matraz aforado,disolver 100 mg de ninhidrina en 10 ml de etanol al 95% y diluir con agua destilada hasta 100 ml. Conservar en un frasco ámbar y en refrigeración.
- Colocar en una gradilla 5 tubos de ensayo, en cada uno de ellos medir 0.1ml de isoleucine, norleucine, (al 0.5% en HCl 0.2M), la muestra problema y albúmina (clara de huevo diluida 1/10 con agua destilada bajo agitación vigorosa). Añadir con muchocuidado (puesto que es cancerígeno) 0.05 ml de la solución de ninhidrina y calentar suavemente en baño maría hasta que se observe un cambio de color. La aparición de color azul o violeta rojizo indica la presencia de aminoácidos en la muestra. Anotar la tonalidad producida con cada uno de los AA patrón.
b) Prueba del ácido nitroso
- Tomar 0.1 ml de cada solución de AA (al 0.5%), de la muestra...