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Materiales y métodos de secuenciación

Dideoxinucleotidos trifosfato
Nucleótidos que no poseen el 3’Oh en la desoxirribosa. La utilidad de estos, es que hace que el proceso de replicación sedetenga ya que no puede formar enlaces fosfodiéster .

Deoxinucleótidos trifosfato.
Son nucleótidos que contiene el grupo fosfato unido al extremo 3´y también poseen un grupo hidroxilo en laposición 5´de la desoxirribosa, son usados para la construcción de la nueva cadena y van siendo agregados por la ADN polimerasa por complementariedad con la hebra antigua.

Primers
Es una secuencia denucleótidos conocidos y complementarios a una cadena molde, son importante ya que sirven como punto de partida en la reacción de replicación.

ADN polimerasa
Es la enzima en que encarga de pegarlos dNTPs en el proceso de replicación y es la mas importante en este proceso. Tiene actividad exonucleasa 5’ a 3’.

Templado
El templado es el ADN de cadena sencilla del cual partimos.

En lostubos de eppendorf se adiciona 5 ul del ADN, ADN polimerasa, Dideoxinucleotidos trifosfato ,Deoxinucleótidos trifosfato y primer. El procedimiento consiste en que la AND polimerasa se une al ADN queagregamos como templado y esta va uniendo los nucleótidos libres hasta que se una el dideoxinucleótido y se termina el proceso de esta y así va pasando con todos los dideoxinucleótidos (ddATPs, ddTTPs,ddCTPs y ddGTPs) después de que este proceso termine se realiza una electroforesis en un gel denaturante y se observa que los nucleótidos están en diferentes posiciones (inferior, media y superior).La lectura de este gel se realiza de la parte inferior a la parte superior. Otra técnica de secuenciación se hace mediante la secuenciación automática y el procedimiento es similar al anteriornombrado con la diferencia que los ddNTPs están marcados y son secuenciados por una maquina y el resultado de esta es un cromatograma. La lectura de este se debe hacer por la longitud de los picos que...