Evolucion

UNIVERSIDAD JUAREZ AUTONOMA DE TABASCO

PRASTICA: EXTRACCION DE ADN VEGETAL POR EL METODO DE BOYLE & DOYLE MODIFICADO POR BEKESIOVA

CATEDRATICA: JULIA LESHER

ALUMNAS:
* JIMENEZ ALEJANDRO LEIDY CRISTEL
* ROSALES MENDOZA MAGDA ELIZABETH

MATERIA: GENETICA

VILLAHERMOSA, TABASCO A 16 DE ABRIL 2011

EXTRACCION DE ADN VEGETAL POR EL METODO DE BOYLE & DOYLE MODIFICADOPOR BEKESIOVA.
INTRODUCCION:
Las plantas presentan gran importancia como modelo experimental en el desarrollo de la biología moderna. Los organismos fotosintéticos proporcionan el oxigeno necesario para todas las formas de vida superior a nuestro planeta. Además el hombre depende de gran medida de las plantas que nos proporcionan alimento, remedio para luchar contra las enfermedades,combustibles y un amplio rango de productos (lodish et al., 2005).
Las características de las plantas están determinadas en el genoma es decir, la información genética en los cromosomas que constituyen la dotación haploide de una especie esta organizada en unidades funcionales denominados genes. La interaccion entre el genoma y el medio ambiente define la biología de un indivudio. (lodish et al., 2005).
Lagenómica vegetal por medio del estudio de variedades con interesantes conbinaciones de genes, pueden relacionar el análisis de sus características fenotípicas de interés agronómica en el análisis de sus genes. De esta forma, la investigación genómica permite marcar con precisión al ganoma de las plantas para identifcar determinadas combinaciones alelicas, es decir, cada una de las formasalternativas que puede tener un gen y posteriormente aislar los genes de interés(www.uciencia.uma.es).
OBJETIVOS:
* Extraer ADN genómico de diferentes vegetales por el método de Doyle & Doyle.
* Identificar y comparar eñ ADN genómico extraido de diferentes muestras vegetales

MATERIALES Y METODOS
* Nitrogeno liquido
* Bisulfito de sodio
* Buffer 1
* Buffer 2
* N-Laurilsarcosina
* Cloroformo Alcohol- Isoamilico 24:1
* Etanol al 96%
* Acetato de Sodio 1 Mol
* Etanol al 70%
* Mortero
* Tubo de falcon
* Tubos eppendorff de 1.5 Ul
* Baño maría
* Centrifuga
* Estufa de secado
* Agua desionizada estéril
* Balanza
* Micropipetas
* Puntillas

Tabla 1 Preparacion de los buffer I Y II para 100 ml.
COMPONENTES |CANTIDAD EN GRAMOS (g) Buffer 1 Buffer 2 |
Sorbitol 0.35 M | 6.37 g | |
TRIS- HCL 0.1 M | 1.21 g | 2.42 G |
EDTA 5Mm | 0.18 g | 1.86 G |
Agua desionizada esteril | 100 mL | 100 Ml |
Cloruro de Sodio (NaCl) 2 M | | 11.6 g |
CTAB 2% | | 2 g |
NOTA: EL BUFFER 1 SE ESTERILIZA EN LA AUTOCLAVE A UNA TEMPERATURA DE 150 °C DURANTE 15 MIN.
*Se esteriliza en el autoclave con un Ph de 7.5 antes de usarse adicionamos debisufito de sodio para logar una concentración final de 0.02 M

Tabla 2 preparación de N-Lauril Sarcosina al 5%

COMPONENTES | CANTIDAD EN GRAMOS (g) Y MILILITROS ( ml) |
N-Lauril Sarcosina | 1 g |
Agua desionizada esteril | 20 mL |

Tabla 3 Cloroformo Alcohol- isoamilico 24: 1 ( no se esterisa)
COMPONENTES| CANTIDAD EN MILILITROS ( mL) |
Cloroformo | 0.6 mL |
Alcohol I soamilico | 14.4 mL |

Tabla 4 Acetato de Sodio 1 Mol
COMPONENTES | CANTIDAD EN GRAMOS (g) Y MILILITROS (mL) |
Acetato de Sodio | 1.6406 g |
Agua Desionizada esteril | 200 mL |

EXTRACCION DE ADN
1. Limpiar y retirar todas la venas y eliminar las hojas que presenten daños. Plagas o enfermedades.
2. Se triturael material vegetal en un mortero utilizando nitrógeno liquido , hasta obtener un polvo fino a -80 °c
3. Transferir el polvo obtenido del material vegetal a tubos falcon limpio.
4. Transferir el polvo del material vegetal triturado a un tubo eppendorff de 1.5 uL que contenga 300 uL de buffer I con bisulfito de sodio y 300uL de buffer II. Con la pipeta azul con sales bufer 1 y 2
5. Se...