EXTRACCI N DE ADN Y ELECTROFORESIS

INFORME N°10
EXTRACCIÓN DE ADN Y ELECTROFORESIS

IMPORTANCIA
En nuestra carrera, que definitivamente es científica, es necesario entender y comprender a fondo, que la importancia de la genética ha ido creciendo poco a poco, ya que la famosa molécula denominada en siglas ADN, es importante puesto que es nuestra esencia orgánica, ya que se encuentra nuestra información genética, nosotros comofuturos médicos, más adelante trataremos las enfermedades ya no con la clásica visión científica, sino con otra perspectiva desde el punto de vista genético, ya que está muy estrechamente relacionada con las patologías, por tal motivo, es de importancia entender y realizar desde ahora procedimientos como extracción de ADN desde muestras sencillas como el hígado de pollo o fresas.

OBJETIVOS
Adiestraral alumno en las técnicas que permitan la extracción y visualización del ADN a partir de un tejido animal, comprobando su estructura fibrilar y gran longitud.

RESULTADOS
1) Extracción de ácidos nucleicos
En esta experiencia, para la extracción de ADN, primero teníamos que romper las células por procedimientos mecánicos. Nuestra muestra fue fresa, la llevamos a un mortero y con el pistiloempezamos a triturar la muestra. Echamos 5ml de SDS (dodecil sulfato de sodio), que actuará como un detergente iónico dispersando los componentes para facilitar la ruptura de las membranas, a su vez separa a las proteínas asociadas a la cromatina desnaturalizándolas.

La solución que obtendremos la llevaremos a un tubo de ensayo por un sistema de filtrado, y le echamos NaCl para romper la carioteca y selibere la cromatina. Le echamos 1 ml de EDTA y lo vaciamos a un vaso precipitado donde lo mantendremos a calor por 15 minutos.









Lentamente por las paredes le agregaremos etanol, que estuvo previamente en el refrigerador. Luego veremos como el ADN va a precipitar y con una bagueta, girando suavemente, enrollaremos el ADN.









2) Electroforesis de ADN
El profesor a cargo del cursorealizó esta experiencia, primero disolvió la agarosa al 0,1%, calentándola hasta su disolución, luego se añadió a una cámara electroforética por 30 minutos hasta que se transforme en gel, luego mezclamos las muestras con buffer de carga; luego de haber realizado esto, colocamos las muestras en los pocillos de la cámara electroforética formados por la peineta, esta parte de la práctica lo hicimosnosotros mismos, con supervisión del profesor a cargo. Posteriormente cubrimos la cámara y lo corremos a 100V por 30 minutos. Una vez realizado esto lo retiramos y procedemos a colocarlo en bromuro de etidio por 15 minutos aproximadamente (cabe recordar que el bromuro es una sustancia muy toxica, debemos realizarlo con sumo cuidado), luego lo enjuagamos, para finalmente colocarlo en el transiluminadorpara su observación.








DISCUSIÓN
En la extracción del ADN se realizaron los pasos correctamente, pero la visualización del ADN fue un poco complicada debido a que teníamos que agregarle más etanol. Mientras se le agregaba más del alcohol, el ADN precipitaba más.
En la práctica de electroforesis de ADN, no se llegó a visualizar muy bien el cromosoma debido a que falto dejarlo reposar por mástiempo.

CONCLUSIÓN
Hay que seguir los pasos correctamente y respetar el tiempo de reposo en cada práctica, para poder tener resultados precisos y visibles.
El ADN genómico de las plantas es más difícil de extraer a causa de la pared celular de la planta, que se elimina por homogeneización o mediante la adición de celulasa para degradar la celulosa que forma la pared celular.
CUESTIONARIO
1) ¿Cuáles la relación entre la concentración de agarosa y la migración de las moléculas?
La agarosa, coloide natural que se extrae de las algas, es un polisacárido lineal (con un peso molecular medio de ~12 000 Da) formado por la repetición de la unidad básica, la agarobiosa, que comprende unidades alternadas de galactosa y 3,6-anhidrogalactosa. La agarosa es muy frágil y las manipulaciones pueden...