Extraccion acidos nucleicos

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UNIVERSIDAD DE GUADALAJARA

Extracción de ácidos nucleicos
METODOLOGÍA AVANZADA Titular de la Materia: Dr Francisco Javier Perea Díaz

Bianca Ethel Gutiérrez Amavizca
Septiembre de 2010

El objetivo de este documento es describir cuales son los métodos utilizados para realizar extracción de acidos nucleicos .

[EXTRACCIÓN DE ÁCIDOS NUCLEICOS]
INTRODUCCIÓN

Septiembre de 2010

Losácidos desoxiribonucleico (ADN) y ribonucleico (ARN) son polímeros de nucleótidos formados por un azúcar de cinco carbones (desoxiribosa en el ADN y ribosa en el ARN), una base nitrogenada (que puede ser adenina, timina, citosina, guanina o uracilo) y una molécula de fosfato. El ADN es la macromolécula que contiene la información genética de las células procariontes, eucariontes y de losadenovirus. El ARN está involucrado en la síntesis de proteínas y constituye el material genético de los retrovirus. La biología molecular es una de las herramientas más utiles de las que se vale hoy en día la ciencia y la medicina moderna. La obtención de ácido desoxirribonucleico (ADN), es el punto de partida para la mayoría de análisis genéticos; incluso contando con pequeñas cantidades de ADN, esposible amplificar genes específicos in vitro a través de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR por sus siglas en Inglés : Polymerase Chain Reaction). Esta revolucionaria técnica le valio a su inventor, Kary B. Mullis, el premio Nobel de química en 1993. Todas las células, a excepción de las células anucleadas de los eritrocitos maduros en humanos, contienen ADN en sus núcleos celulares. Tambiénpodemos encontrar ADN dentro de otros compartimentos celulares diferentes al núcleo, como las mitocondrias y los cloroplastos. La cantidad de ADN presente en algunos tejidos es muy pequeña; por este motivo no representa una fuente conveniente de extracción, aislamiento y purificación, para ser empleado en diferentes estudios de carácter genético, biológico. y/o bioquímico. Muchos tejidos contienenalta actividad de desoxirribonucleasa (DNAasa) que rompe la macromolécula en pequeños fragmentos. Para seleccionar un tejido como fuente de ADN debe reunir dos condiciones: contener gran cantidad de material genético y poseer baja actividad de DNAasa. El tejido linfoide: el timo y el bazo representan materiales biológicos que son utilizados con mucha frecuencia como fuente de cantidadesconsiderables de ADN para diferentes estudios. Después de extraído el ADN suele ser rápidamente desnaturalizado y por lo tanto se debe tener mucho cuidado en su remoción, aislamiento y purificación con el fin de obtener un producto que conserve la identidad e integridad estructural con el ADN de la célula de la cual proviene. El estrés o tensión mecánica o físico química, que acompañan los procesos depurificación de las moléculas de ADN deben ser evitadas al máximo y las nucleasas inhibidas. Factores como los iones Ca2+ y Mg2 son importantes para la actividad del las DNAasas .El citrato de sodio presente en las soluciones empleadas para la extracción y purificación del ADN, atrapa estos iones e impide, de esta forma, la acción de las enzimas que digieren estas moléculas. Con el fin de eliminar enforma definitiva la actividad de las nucleasas, las etapas de remoción de las proteínas deben ser llevadas a cabo tan rápido como sea posible y en frío. El ADN en el laboratorio Precauciones El trabajo de biología molecular requiere de una serie de precauciones para no contaminar las muestras con ácidos nucleicos extraños. Es necesario limpiar las áreas de trabajo con solventes como el ácidoclorhídrico (10%), sosa (NaOH, 0.5 N) y/o etanol (70%). También hay que utilizar guantes para protección personal y para evitar contaminar las muestras, así como trabajar con materiales y soluciones estériles. UNIVERSIDAD DE GUADALAJARA | 2

[EXTRACCIÓN DE ÁCIDOS NUCLEICOS]

Septiembre de 2010

Se recomienda trabajar en una campana de flujo laminar y si es posible, someter el material a...
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