Extraccion de adn

Obtención de ADN de Escherichia coli
RESUMEN
Palabras clave:
INTRODUCCION
MATERIALES Y METODOS
Los materiales y el procedimiento de la práctica de laboratorio corresponde con el indicado en:
Guía de Laboratorio de Biología Celular y Bioquímica I, obtención de ADN de Escherichia coli; Universidad del Valle, Cali.
Con las modificaciones que se muestran a continuación: en lugar de utilizar5 ml de solución salina-citrato diluida para el punto 1.2. Extracción y desproteinización del ADN se utilizaron 3 ml. en el punto 3 prueba cuantitativa del ADN extraído no se utilizó 1 ml de solución de ADN de E. coli sino 2 ml y para el punto 2 prueba cualitativa con difenilamida no se preparó el tubo 4, sino que los datos para este tubo fueron obtenidos del tubo N° 5 del punto 3.
RESULTADOSpor el método de Marmur se obtuvo el ADN de un cultivo de bacterias de Escherichia coli, los pasos llevados a cabo para la realización de dicho método y el cambio presentado por el cultivo de bacterias en cada paso se muestran en las tablas N° 1, mientras que el procedimiento realizado para la extracción y desproteinización del ADN se muestran en la tabla N° 2.
Tabla N° 1: lisis de las célulasbacterianas, con los cambios presentados por el cultivo en los diferentes procedimientos.
PROCEDIMIENTO | OBSERVACIONES |
Tratamiento con lisozima e incubación a 37 °C. | El cultivo bacteriano es homogéneo de un color amarilloso con muchas burbujas en la parte superior, se nota espeso. |
Tratamiento con SDS e incubación a 60 °C. | En la solución se comenzaron a formar grumos y la coloración seintensifico. |

Tabla N° 2: extracción y desproteinización del ADN, con los cambios sufridos por el cultivo en cada procedimiento.
PROCEDIMIENTO | OBSERVACIONES |
Tratamiento con perclorato de sodio | Los grumos de la solución comenzaron a disociarse y se formaron 2 capas, un sedimento de color blanco y apariencia lechosa mientras que el sobrenadante fue translucido. |
Tratamiento concloroformo-alcohol isoamilico | La diferencia entre la densidad de la sustancias desapareció quedando una solución homogénea de un color blanco, muy ligera. |
Tratamiento con etanol y agitación con la varilla de vidrio | formación de 2 fases nuevamente, el sedimento translucido y el sobrenadante blanco el cual se fue disolviendo poco, hasta que la solución fue translucida homogénea, mientras que enla parte inferior de la varilla quedaron suspendidas las fibras de ADN. |
Disolución en salina-citrato | Solución homogénea translucida. |

Una vez obtenido las fibras de ADN del cultivo bacteriano de Escherichia coli por medio del método de Marmur se pasó a la segunda parte del experimento que consistió en un prueba cualitativa con difenilamida, cuyos resultados se muestran en la Tabla N° 3y se ilustran en la Figura N° 4 y una prueba cuantitativa, donde se tomó el valor de la absorbancia a una longitud de onda de 595 nm, estos resultados se muestran en la tabla N° 5.
Tabla N° 3: resultados colorimétricos de la prueba cualitativa con difenilamida.
TUBO | 1 | 2 | 3 | 4 |
CONTENIDO | ADN patrón | ARN patrón | ADN de E.coli | Blanco |
COLOR | Azul | incoloro | Azul claro |incoloro |

Figura N° 4: prueba cualitativa con difenilamida. Blanco, ARN patrón, ADN de E.coli, ADN patrón.
Tabla N° 5: resultados de la prueba cuantitativa del ADN extraído.
TUBO N° | ABSORBANCIA | [ADN], mg/ml |
1 | 0,023 | 0,033 |
2 | 0,047 | 0,066 |
3 | 0,177 | 0,166 |
4 | 0,234 | 0,33 |
5 | 0,043 | desconocida |
6 | 0 | 0 |

Con los datos de absorbancia y concentración de ADN,tabulados en la tabla N° 5, se realizó una regresión lineal con el fin de calcular el valor de la concentración de ADN obtenido de la bacteria Escherichia coli

Figura N° 6: concentración de ADN vs absorbancia presentada 595 nm.
Con la ecuación de la forma Y= mx + b, obtenida de la regresión lineal se despejo el valor de la concentración cuando la absorbancia era igual a 0.043 y se encontro...