FACTORES QUE AFECTAN LA ACTIVIDAD ENZIMATICA


INFORME
FACTORES QUE AFECTAN LA ACTIVIDAD ENZIMATICA
Grupo 003
DISCUSIÓN DE RESULTADOS
La α-amilasa es una enzima proteica que se encuentra en la saliva humana y cataliza la degradación del almidón, que es un polisacárido de reserva vegetal. El almidón está formado por dos tipos de moléculas: la amilosa y la amilopectina, ambos polisacáridos de glucosa.

Nombre: alfa-amilasa(alpha-amylase)

Nombres comunes: glicogenasa, endoamilasa, taka-amilasa A

Nombre sistemático: 4-alfa-D-glucano Glucanohidrolasa

Clasificación:
3. Hidrolasas
3.2 Glicosilasas
3.2.1 Glicosidasas, es decir, las enzimas que hidrolizan O-y los compuestos S-glicosil
3.2.1.1 Alfa-amilasa.

Reacción: Endohidrólisis de (1 -> 4)-alfa-D-glucosídicos en polisacáridos que contienen tres o más (1 ->4)-alfa ligados a unidades de D-glucosa.








Comentarios: Actúa en almidón, glucógeno y relacionados polisacáridos y oligosacáridos en forma aleatoria, la reducción de grupos se liberan en la configuración alfa. El término "alfa" se refiere a la configuración anomérica inicial del grupo de azúcar libre liberado y no a la configuración de la vinculación hidrolizada.

Estructura:Primaria: Por homología con otros alfa- amilasas, algunos importantes residuos del sitio activo se identifican como Asp179, Glu204 y Asp289 , y están situados en el extremo C - terminal. Un sitio de unión del gránulo de almidón, previamente identificado como Trp276 y Trp277, está situado en la superficie de la enzima.


Secundaria: Los pliegues de la cadena de polipéptido en tres dominios: un dominiocentral que forma un ( alfa, beta ) 8 - barril de 286 residuos , con un dominio de bucle estructurado irregulares que sobresale de 64 residuos ( dominio B ) que conectan hebra beta 3 y hélice alfa 3 del cañón , y un dominio C -terminal de 53 residuos de la formación de un cinco de lámina beta antiparalela.



Terciaria: La estructura tridimensional de la alfa - amilasa consiste en 403residuos de aminoácidos, tres iones de calcio y 153 moléculas de agua.






Prueba de Lugol: Reconoce el reactivo de la reacción catalizada que en este caso es el almidón y como producto la maltosa (disacárido de glucosa). No es tanto una reacción química sino que se forma un compuesto de inclusión que modifica las propiedades físicas de esta molécula apareciendo una coloración azul-violetadebido a la presencia del yodo que se fija en la superficie de la molécula del almidón, fijación que solo tiene lugar en frio.
Prueba de Fehling: La prueba de Fehling A y B reconoce el producto de la reacción catalizada. Se basa en el carácter reductor de los monosacáridos y de la mayoría de los disacáridos (excepto la sacarosa). En este caso, en el producto de esta reacción se obtiene maltosa y alser una azúcar reductor, se oxidara dando lugar a la reducción del sulfato de cobre (II), de color azul, al oxido de cobre (I), de color rojo-anaranjado. Esta reacción se produce en medio alcalino fuerte, por lo que algunos compuestos no reductores como la fructosa que contiene un grupo cetona, puede enolizarse a la forma aldehído dando lugar a un falso positivo. Al reaccionar con monosacáridosse torna verdoso, y si lo hace con disacáridos toma el color del ladrillo.

Prueba No 1 EFECTO DE LA TEMPERATURA EN LA REACCION
Las enzimas resistentes al calor, termófilas, pueden tener aplicaciones evidentes. Se han usado para mejorar reacciones usando temperaturas más altas en procesos industriales. . La enzima es resistente al calor, pues a 70ºC conserva un 70% de su actividad. Actúa sobrealmidones crudos y gelatinizados.

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Prueba No 2 EFECTO DEL pH EN LA REACCION
Por su acción, la α-amilasa es sensible a una acidez elevada y se vuelve inactiva a pH 3,3 o a pH menor a 0ºC por 15 minutos. El pH óptimo de acción está dentro del rango de 5 – 7, siendo 6.5 el más adecuado.
pH 10:
Lugol: en los primeros 5 minutos se observa un resultado positivo,...