Fisicoqúimica

ESPECTROFOTOMETRIA
La espectrofotometría es el método de análisis óptico más usado en las investigaciones biológicas. El espectrofotómetro es un instrumento que permite comparar la radiación absorbida o transmitida por una solución que contiene una cantidad desconocida de soluto, y una que contiene una cantidad conocida de la misma sustancia.
Todas las sustancias pueden absorber energíaradiante, aun el vidrio que parece ser completamente transparente absorbe longitud de ondas que pertenecen al espectro visible; el agua absorbe fuertemente en la región del infrarrojo.
La absorción de las radiaciones ultravioleta, visibles e infrarrojas depende de la estructura de las moléculas, y es característica para cada sustancia química.
Cuando la luz atraviesa una sustancia, parte de la energíaes absorbida; la energía radiante no puede producir ningún efecto sin ser absorbida.
El color de las sustancias se debe a que éstas absorben ciertas longitudes de onda de la luz blanca que incide sobre ellas y solo dejan pasar a nuestros ojos aquellas longitudes de onda no absorbida.
. LEY DE BEER
“La absorbancia de una solución es directamente proporcional ala concentración y a la longitud delpaso de la luz”.
                                                        A =  . b. c
Siendo:
A: absorbancia. No tiene unidades.
: el coeficiente de extinción molar, también llamado coeficiente de absorción. Es constante para un compuesto dado siempre que se fijen condiciones de longitud de onda, de pH, de temperatura, de solventes, etc. Sus unidades son 1/ (mol/cm).
b: es la longitud depaso de la luz, en cm.
c: es la concentración del absorbente. Se mide en mol/L.
 
La aplicación práctica de la Ley de Beer es, que conociendo la absorbancia de una sustancia podemos averiguar su concentración y esto lo podemos hacer de dos formas:
1.                              Por comparación con una solución conocida: si tenemos 2 soluciones, una problema (P) y una estándar (S), podemosestablecer la siguiente relación matemática entre ellas: 
2.                              A través de una curva de calibración: la curva de calibración es la representación gráfica en un eje de coordenadas de la Absorbancia (eje de ordenadas) frente a la Concentración (eje de abcisas). Se ensayan varias soluciones de concentración conocida y se determinan sus A, construyéndose la curva de calibrado,que es una recta. Una vez ensayadas las soluciones problemas, su concentración se averigua por interpolación de las A de las soluciones problema en la curva de calibración.
     Hay que tener en cuenta la LINEALIDAD, que es el intervalo de concentraciones del cromógeno entre las cuales existe una relación lineal entre Absorbancia y Concentración.
     Cuando la concentración del cromógenosobrepasa los límites de linealidad se deja de cumplir la Ley de Beer, convirtiéndose la recta en una curva. La lectura de la Absorbancia fuera de los límites de linealidad se traduce en una concentración falsamente baja de cromógeno. En esta situación, hay que diluir la muestra para que su concentración entre en los límites de la linealidad.                                                                   Empleo de los Factores de Calibración: Para reactivos estables y sistemas fotométricos estables, este factor se puede mantener constante, siendo sólo necesario ensayar las muestras problema multiplicando la A resultante por el factor F.
http://perso.wanadoo.es/sergioram1/espectrofotometria.htm
Curva Patrón
Es un marco de referencia que se construye de cantidades conocidas de una
sustancia (por ejemplo la albúmina sérica bovina) que se utilizapara determinar
la cantidad de proteínas presente en una muestra incógnita.
bioquimexperimental.files.wordpress.com/.
solución
Las soluciones son mezclas homogéneas formadas por dos o más sustancias. Las soluciones más sencillas están formadas por dos componentes llamados soluto y solvente. El soluto es la fase dispersa y se...