Fotometria de absorcion practica

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TERCERA PRÁCTICA BIOQUÍMICA

Introducción a la fotometría de absorción.

Un gran número de las técnicas analíticas existentes en el laboratorio guardan relación con la formación de compuestoscoloreados al hacer reaccionar las sustancias analíticas con reactivos específicos. La intensidad del color desarrollado en este proceso en función de la concentración o cantidad de sustancia a medirpresente en la muestra.

Las soluciones coloreadas son capaces de absorber luz de una determinada longitud de onda. Cuando un rayo monocromático, de intensidad I0, incide sobre una solución coloreadaparte de la luz es reflejada (Ir), otra es transmitida (It) y otra es absorbida por la solución (Ia). Cuando este rayo incide perpendicularmente Ir, es igual a 0, con lo que:

I0=It + Ia

Sedenomina transmisión (T) a la cantidad de luz que es recogida tras atravesar la solución, y se puede expresar como:

T= It/I0

La transmisión o transmitancia puede tener como valor máximo 1, siendo encondiciones normales menor de 1.

Al inverso de la transmisión, Opacidad (O) siendo esta:

O=1/T
Ley de Lambert-Beer
Estos autores, obsercando la relacion existente entre la intensidad del rayoincidente sobre una solucion y el transmitido encontraron que esta relacion dependia del espesor que tenia que atravesar el haz de luz, de la naturaleza de la sustancia a atravesar y de laconcentracion de dicha sustancia en la solucion. De forma que la Transmisión viene regida por la fórmula siguiente:
T= 10 -E.x.c

en donde:
E= coeficiente de extinción molar, característico de cada sustanciay dependiente de la longitud de onda.
X= espesor que tiene que atravesar el haz de luz.
C= concentración de la sustancia en disolución.

Se denomina extinción, absorbancia(A) o densidad óptica(DO) al logaritmo de la Opacidad, de forma que la ecuación anterior puede escribirse:

A=log1/T
A=log1/10 -E.x.c
A=E.x.c
Fundamento de la reacción de Biuret.

A una solución proteica se le añade...
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