Fundamento Western Blot

WESTERN BLOT
FUNDAMENTO.
El western blot es un método en biología molecular/bioquímica/inmuno genética para la detección de proteínas en una muestra de un tejido homogeneizado o extracto.Implementa gel electroforesis para separar proteínas desnaturalizadas de la masa. Las proteínas son trasferidas desde el gel hacia la membrana (originalmente de nitrocelulosa), donde son examinadas utilizandoanticuerpos específicos para la proteína. Como resultado, los investigadores pueden examinar la cantidad de proteínas en una muestra y comparar los niveles de presencia entre varios grupos. Otrastécnicas, también usando anticuerpos, permiten la detención de proteínas en tissues (inmuno histoquímica) y células (inmunocitoquímica).
Todo procedimiento de 'blotting' consta de 5 etapas:Inmovilización de proteínas sobre la membrana ya sea mediante transferencia (electroforética, aspiración, presión, ...) o mediante aplicación directa.

Saturación de todos los lugares de unión de proteínas dela membrana no ocupados para evitar la unión no específica de anticuerpos, que son proteínas.

Incubación del 'blot' con anticuerpo primarios contra la/s proteína/s de interés.

Incubación del'blot' con anticuerpos secundarios, o reactivos que actúan de ligando del anticuerpo primario unidos a enzimas u otros marcadores.

Las bandas de proteínas marcadas con enzimas se hacen visibles porincubación con los sustratos apropiados para formar productos coloreados insolubles en el lugar donde se encuentran las bandas de proteína.


Hay tres métodos para transferir proteínas a lasmembranas:

1. Transferencia capilar
2. Transferencia por difusión
3. Transferencia electroforética ('electroblotting')
En la actualidad se usa como Pruebas de confirmación para infección por VIH
Laspruebas llamadas de confirmación tienen como objeto verificar (confirmar) que los resultados obtenidos con las pruebas de cribado son correctos.
En este caso el Western blot:
El fundamento de la...