Hemoglobina glicosilada

Materiales requeridos, pero no incluidos. Espectrofotómetro capaz de leer absorbancias a 415 nm (405-420nm) Pipetas serológicas o automáticas 1.0 mL, 0.02 mL (20µL), 0.1mL (100µL), 0.5 mL (500µL) , 5.0 mL (5000µL). Tubos de ensaye 13 x 100 mm Agitador de hematología. Recolección y preparación de la muestra. Es preferible la recolección de sangre con EDTA, pero también se puede utilizar heparina.Estabilidad de la muestra: La glicohemoglobina en sangre recolectada con EDTA es reportada estable por 1 semana de 275 – 281 K (2 – 8 °C). Substancias de interferencia. 1. Lipemia gruesa puede causar falsos resultados altos. 2. La hemoglobina fetal (Hbf) no tiene interferencias significativas. 3. La HbS glicosilada, HbC y otras hemoglobinopatías se unen fuertemente a la resina, dando así falsosresultados bajos. 4. La anemia hemolítica tambien produce resultados bajos. 5. La fracción inestable (aldimina) se elimina durante la mezcla de la resina y no contribuye al valor de la glicohemoglobina. Procedimiento: Preparación del hemolizado: 1. Pipetee 0.5 mL (500µL) del reactivo de lisis en tubos previamente marcados como Estándar (S), Muestra (M) y Control ( C ). 2. Pipetee 0.1 mL (100µL) dela muestra de sangre mezclada en los tubos apropiados y mezcle. 3. Déjelo reposar por 5 minutos a temperatura ambiente 288 – 298 K (15 – 25°) para completar la hemólisis. Ensayo y separación de la Glycohemoglobina: 1. Marcar los tubos de resina Pre-Fil como, Estándar (S), Muestra (M) y Control ( C ). 2. Pipetee 0.1 mL (100µL) del preparado hemolizado dentro de los tubos de resina marcadosapropiadamente. 3. Coloque el separador de resina en el tubo de manera que el manguito de plástico quede aproximadamente 1-2 cm por arriba del nivel del liquido. 4. Mezcle los tubos en un agitador hematológico por 5 minutos. Alternativamente, se pueden mezclar los tubos manualmente si se toman por la parte superior de la resina. 5. Al final de los 5 minutos de mezcla. Empuje el separador de resina dentroldel tubo hasta que la resina este firmemente colocada en un botón en el tubo de 13 mm. 6. Vaciar cada sobrenadante dentro de cubetas separadas para leer las absorbancias. 7. Leer las absorbancias (Agly) del Estándar (S), Muestras (M), y Controles (C) contra agua, a 415 nm antes de 60 minutos. Ensayo para hemoglobina Total. 1. Pipetee 5.0 mL de agua desionizada a tubos marcados como Estándar (S) ,Muestra (M) y Control ( C ). 2. Añada 0.02 mL (20 µL) del hemolizado en los tubos apropiados. Mezcle bien y transferir a las cubetas para leer la absorbancia. 3. Leer la absorbancia (Atot) del Estándar , Muestra y Control contra agua a 415 nm dentro de 60 minutos. Control de Calidad. Se deben incluir controles para Glicohemoglobina determinados por este método en cada serie de pruebas. Liconrecomienda la utilización de sus controles dosniveles (Normal, Anormal) ó controles de 3 niveles ( Normal, Medio rango, Anormal) para este propósito. Resultados. Para cada Estándar y Muestra calcule el Rango ( R ) de absorbancia de la glicohemoglobina y de la absorbancia de la hemoglobina total como sigue: A gly R = -----------A tot Glicohemoglobina (%) R ( Muestra) =----------------------R ( Estándar)x Concentración del Estándar de la Glicohemoglobina (%)

Ejemplo: Un Estándar que contiene 10.0 % HbA1 dio una absorbancia (Agly) de 0.480 para la fracción de Glicohemoglobina y 0.575 para la fracción de la hemoglobina total (Atot). La Muestra dio un valor de absorbancia de 0.962 y 0.746. 0.480 R (Estándar) = ------------- = 0.835 0.575 0.962 R (Muestra) = ------------- = 1.290 0.746

StanbioGlicohemoglobina (Pre-Fil)
Para la Determinación Cuantitativa Colorimétrica de la Glicohemoglobina en sangre total.
Principio y resumen. La Glicohemoglobina es formada progresivamente e irreversiblemente en los eritrocitos durante sus 120 días de vida. La concentración de Glicohemoglobina en los glóbulos rojos dependen del promedio de concentración de glucosa durante un cierto periodo de...