Hibridacion

La hibridacion consiste en una mezcla de orbitales puros en un estado excitado para formar orbitales puros en un estado excitado para formar orbitales hibridos equivalentes con orientaciones determinadas en el espacio
Tipos de hibridaciones
Hibridación sp3
Para los compuestos en los cuales el carbono presenta enlaces simples
Se le conoce como hibridación tetraédrica
Hibridación sp2
En lahibridación trigonal se hibridan los orbitales 2s, 2px y 2py, resultando tres orbitales idénticos sp2 y un electron en un orbital puro 2pz
El carbono hibridado sp2 da lugar a la serie de los alquenos
Un enlace de tipo o por solapamiento de loss orbitales hibridos sp2
Un enlace de tipo pi por solapamietno del orbital 2pz
El enlace pi es mas débil que el enlace o lo cual explica la mayorreactividad de los alquenos , debido al grado de insaturacion que presentan los dobles enlaces
El doble enlace impide la libre rotación de la molecula
Hibridación sp
Los atomos que se hibridan poseen un juego un orbital s y uno p, para dar los orbitales hiridos sp, colineales formando un angulo de 180º
Los otros dos orbitales p no experimentan ningún tipo de perturbación en su configuraciónHibridación
La hibridación es un fenómeno importante y muy utilizado en todas las áreas de la biología molecular. Una vez que ya hemos conocido los fundamentos que mantienen unidas las dos hebras del DNA y aquellos que las separan, vamos a estudiar cómo se pueden emplear en el laboratorio. Recordemos que la temperatura (y algunos agentes químicos) pueden desnaturalizar el DNA de forma reversiblesiempre que la temperatura (o el agente) disminuya lentamente. Si se hace descender bruscamente, cada hebra de DNA tiende a reasociarse consigo misma y formar un ovillo que se estabiliza por fuerzas intramoleculares. Como consecuencia, se obtiene un DNA sin utilidad para ningún manejo biológico y cuya absorbencia es menor que el desnaturalizado, pero mayor que como dsDNA.
Principios básicos
Lahibridación entre se cuencias se basa en la especificidad de la interacción entre las bases nitrogenadas de distintas cadenas, de manera que se favorezca su asociación y se disminuya la posibilidad de reasociaciones intracatenarias así como las hibridaciones inespecíficas. Para empezar, hay que contar con una secuencia dediana dentro de un fragmento de DNA y con una sonda, que no es más que unfragmento pequeño de DNA de secuencia conocida y complementaria a la secuencia de diana. Cuando la sonda y la diana se encuentran, el dúplex se identifica con radiactividad, fluorescencia o colorante, según de la manera en que la sonda se hayamarcado.
El DNA a hibridar debe digerirse previamente con una o varias enzimas de restricción para dar lugar a una serie de fragmentos discretos y repetitivos quese pueden resolver en una electroforesis en un gel de agarosa. Este gel de agarosa se «replica» sobre un filtro de nitrocelulosa o nilón mediante la transferencia (en inglés blot) del DNA desde el gel hasta el filtro. Para que el DNA se transfiera es necesario sumergir el gel en una solución alcalina, de manera que éste de desnaturaliza al romperse los puentes de hidrógeno. La desnaturalizacióndel DNA es esencial para que, posteriormente, la sonda pueda encontrar su secuencia complementaria. Si el DNA a transferir es de gran tamaño, entonces conviene dar antes un tratamiento con rayos UV o una solución ácida para introducir mellas que permitan que los fragmentos difundan a través de la agarosa.
A continuación, el gel se neutraliza para permitir que el DNA desnaturalizado se transfieracomo cadenas sencillas a la membrana. Ésta transferencia se produce por capilaridad desde el gel hasta el filtro. También se han desarrollado métodos rápidos por transferencia al vacío.
Una vez inmovilizado el DNA sobre el filtro, se rastrea el fragmento con la sonda específica. Se forman así una serie de DNA híbridos bicatenarios cuya estabilidad va a depender de la cantidad de bases apareadas:...