Hidratos de carbono: Oligosacáridos en soja. Extracción e identificación.

Trabajo Practico Nº 3


Tema: Hidratos de carbono: Oligosacáridos en soja. Extracción e identificación.




Profesora: Valle, Lorena.
Alumna: Blázquez, Milena.
Carrera: Ingeniería en Alimentos.









Objetivos:
Extraer los oligosacáridos hidrosolubles presentes en la semilla de soja.
Identificar los mismos a través de cromatografía en capa fina.
Introducción: Loscarbohidratos son la principal fuente de energía para el metabolismo y las reacciones de síntesis. Sirven como componentes estructurales y portan información.
Químicamente se definen como polihidroxialdehídos y polihidroxicetonas. La unidad básica de los carbohidratos son los monosacáridos. Los oligosacáridos están constituidos por unas pocas unidades monoméricas (hasta 10) unidas por enlacesglucosídicos.
En este trabajo práctico vamos a identificar los sacáridos solubles presentes en el poroto de soja, leche entera y leche deslactosada.La técnica que vamos a utilizar para separarlos es cromatografía en placa fina o TLC, que tiene como principio de separación la adsorción.
Fase estacionaria: utilizaremos Sílicagel 60 G u oxido de silicio, es un solido adsorbente y la separación se lleva acabo en la adsorción de los solutos en esa fase.
Fase móvil: utilizaremos 2 sistemas de solventes, alcohol isopropílico al 90%; y acetato de etilo isopropanol agua piridina. Donde la diferencia entre estos solventes está dada por la polaridad de los mismos.

PARTE EXPERIMENTAL
Materiales y Reactivos
Solución de carbohidratos de referencia al 1% m/v.
Alcohol isopropílico.
Acido sulfúricoconcentrado.
Metanol
Cloruro de N-(1-naftil) etilendiamida.
Placa de TLC (Whatman K5).
Procesadora, mixer.
Tubos de centrífuga.
Capilares de vidrio.
Guantes
Papel de filtro.

Preparación de las muestras:
Llevamos a la procesadora los porotos de soja previamente hidratados, y agregamos agua destilada para obtener una mezcla homogénea. Filtramos la muestra y preparamos una solución al10% v/v. Para mejorar el proceso de purificación agregamos unas gotas de ácido acético, que desnaturaliza las proteínas. Inmediatamente para que la solución se homogeneice, agitamos y filtramos nuevamente. La solución resultante es la que sembramos luego.
Pesamos 2.5 g de leche entera y disolvimos en 25 ml de agua destilada. Para reducir las grasas, calentamos la leche hasta punto de ebullición yluego con una varilla sacamos la membrana que se forma al hervirla. Dejamos enfriar y agregamos unas gotas de ácido acético, agitamos y por ultimo filtramos.
Para la preparación de la muestra de leche deslactosada procedimos de la misma manera que para la elaboración de la muestra de leche entera.

Siembra y desarrollo del Cromatograma: Las placas que utilizamos para realizar la cromatografíafueron entregadas por la profesora. Con un lápiz dibujamos la línea de siembra, a 2cm del borde inferior, y marcamos 4 puntos de sembrado en cada placa (una para cada solvente). En los cuales nuestro grupo sembró:
1. Leche deslactosada
2. Leche entera
3. Lactosa 1%
4. Glucosa
Los otros dos grupos realizaron la siembra de:
5. Soja 9. Ramnosa
6. Sacarosa10. Glucosa
7. Rafinosa 11. Sacarosa
8. Lactosa 12. Glucosa 6P

Realizamos la siembra en cada placa 4 veces, secándolas después de cada sembrado.
Una vez terminado el cultivo las llevamos a las cubas correspondientes de cromatografía, preparadas con el solvente determinado. Dejamos durante 70 minutos el acetato deetilo isopropanol agua piridina y 105 minutos el alcohol isopropílico (tiempo que duró la corrida cromatográfica de cada solvente).
Luego, bajo campana, retiramos las placas de las cubas y las secamos con un secador. Una vez seco les colocamos el revelador, y secamos nuevamente. Como estas sustancias son incoloras procedimos a determinar su posición relativa mediante revelado con luz UV Por...