HISTOLOGIA


HISTOLOGÍA


Las células, se pueden estudiar desde tres puntos de vista:
Desde su composición química (Bioquímica).
Estructuralmente (Histología).
Desde el punto de vista funcional (Fisiología).

La histología estudia la estructura de las células desde el punto de vista microscópico. Se puede estudiar en:
Células vivas: podemos estudiar su movimiento, pero no su composición.
Célulasmuertas: en ellas sí que podemos observar su composición.

Para ver las distintas células hay que romper las membranas citoplasmáticas. Para ello hay distintos métodos:
Mecánicos: p.e. homogeneizadores
Físicos: p.e. ultrasonidos
Químicos: p.e. detergentes

A la solución resultante se le introduce en un tubo de centrifuga donde se depositarán las organelas de mayor peso molecular,superiormente las de menor peso y arriba del todo las soluciones ( Centrifugación diferencial)
Para hacer una separación más específica, se hace una centrifugación por gradientes. En el tubo se añade una sustancia, sacarosa, y dependiendo de las organelas que tengamos en el tubo se separarán de manera mucho más específica; obteniéndose una centrifugación más selectiva y precisa.

El estudio de célulasvivas se puede realizar mediante tres métodos:
1. Esteorización de los órganos o transiluminación. Lo usan los biólogos, por ejemplo para observar la membrana que algunos animales tienen entre las patas. En humanos se usa para estudiar las asas intestinales y procesos de inflamación. Ya no se utiliza pero al principio dio muchos datos sobre la inflamación. No se puede usar durante mucho tiempoporque se contaminan las muestras.
2. Cámaras naturales y artificiales. Por ejemplo, en la oreja de un conejo se puede introducir un cristal y observar las células directamente a través de él, pero el cristal se empaña Por ello se empezaron a utilizar cámaras naturales como la córnea. Tiene límite temporal de utilización y es engorroso.
3. Cultivos celulares. Técnica actual. Nos permite manipularlas células. Se basa en observar a las células y a su actividad. Los cultivos celulares se basan en coger células y observar la dinámica, movimiento, actividad, y además, podemos manipularlas.

El estudio de células muertas:

1. FIJACIÓN
Cuando una célula muere y la queremos estudiar, tenemos que conservar las características de esta lo máximo posible con el método de fijación ,evitando lasalteraciones. Si la fijación no es buena los datos no van a ser correctos, van a estar enmascarados o alterados.
La fijación se puede llevar a cabo introduciendo el liquido fijador por vía sanguínea. Este va a ir sustituyendo la sangre. Así se fija en los animales de experimentación. Después se introduce en un liquido post-fijación para que la fijación sea mayor.









Otro método esfijar componentes como:
las proteínas
deshidratación: se extrae el agua, mediante alcohol etílico o acetona.
Desnaturalización: mediante el formol, aunque en realidad se usa paraformolaldehido en microscopia óptica al 10% con un pH de 7,4 glu,
formación de sales: mediante p.e. acido cítrico.
métodos que cambian el estado coloidal de las proteínas: cambian su punto isoeléctrico usando acidoacético)
La grasas se fijan con tetraóxido de osmio.
Los hidratos de carbono son difíciles de fijar y para ello usamos alcoholes etílicos.

Para el estudio con microscopía electrónica se usa el glutaraldehído al 2,5% en tampón fosfato a pH 7,4.
Se introduce en un tubo de precipitados de volumen diez veces mayor que la pieza durante 12-24 horas con los fijadores. Así se para la degradación. Acontinuación se corta pero como la pieza es blanda, se endurece por congelación o por inclusión. Los métodos de inclusión son parafina para microscopía óptica y resinas para microscopía electrónica. La introducimos en cantidades de alcoholes orgánicos, después en bencenos y por ultimo en una parafina y en una estufa.
Se necesita introducirla en alcoholes y bencenos para que la parafina se...