hola

LABORATORIO BIOLOGÍA MOLECULAR









Stephanie Arias
Mayra Botero
Victoria Cárdenas
Lizedt Marcela Ceballos




SEGUNDO SEMESTRE


Procedimiento Para Master Mix PCRMuestras:
Parvovirus A
Parvovirus B
Parvovirus C

Estas tres muestras fueron tomadas de 3 perros diferentes en los cuales presentaban los mismos síntomas, que nos indicaban que posiblemente eraParvovirus canino, se procedió a extraer el ADN original del Parvovirus para analizar, esta extracción de ADN fue comprada en un laboratorio el cual ya estaba procesado. Y de ahí ya procedemos a generarlos 50 Micro litros de mezcla, para analizar las muestras en los cuales se dividirá de la siguiente manera:

Agua ultra Pura = 14 Micro litros.
MgCl2 = 9 Micro litros.
Buffer = 10 Micro litros.Primers = 5 micro litros. → Manipular previamente
DnTp = 5 Micro litros. → Manipular Previamente
Taq Polimerasa = 2 Micro litros.
Muestra del Virus a analizar = 5 Micro litros

Para un total de unamezcla de 50 micro litros, por cada reacción el volumen estándar es de 50 micro litros por muestra.

Antes de todo estos procesos debemos de tener en cuenta, que primero se extrae el ADN sea haymismo en el laboratorio ó existen laboratorios en los cuales uno compra el ADN ya procesado listo para utilizarse, y para un análisis de cualquier muestra se debe de tener la muestra patrón y otramuestra que nos sirve para comparar si hay control negativo y control positivo.





Procedimiento.

Con unas pipetas electrónicas se mete la mezcla en unos tubos de eppendorf colando la medidaexacta que son los 45 micro litros y los 5 micro litros de la muestra del virus, se divide en este caso en 5 tubos.
1. positivo, el cual tiene la extracción del virus más la mezcla.
2. El controlnegativo contiene la mezcla y agua ultra Pura.
3. El tercer tubo tiene la muestra A
4. El cuarto tubo tiene la muestra B
5. El quinto tubo tiene la muestra C
Luego todas estas mezclas se llevan al...