Informe Bioquimica
Páginas: 6 (1352 palabras)
Publicado: 6 de noviembre de 2015
INHIBICIÓN ENZIMÁTICA
Tamara Bustamante; Valeria Garay; Lorena Nicoman; Francisca Rusque
copooa@hotmail.com
Pamela Fernanda Novoa Catalán
RESUMEN:
En el desarrollo de la actividad realizada en el laboratorio, se buscará la inhibición enzimática de la fosfatasa alcalina, con la acción del fosfato Diácido de sodio, donde a través de la absorbancia se obtendrá la velocidad de reacción cony sin la acción del inhibidor y junto con la concentración de sustrato, se obtendrán los parámetros cinéticos con y sin su acción, obtenidos por la ecuación de la recta para identificar y demostrar el tipo de inhibidor, a través de la representación gráfica.
Inhibidor; Fosfatasa Alcalina; parámetros cinéticos, velocidad de reacción, concentración sustrato.
INTRODUCCION Y OBJETIVOS
Existenfactores que alteran la actividad enzimática, como los inhibidores, los cuales son sustancias que retardan o detienen la reacción. La unión de un inhibidor puede impedir la entrada del sustrato al sitio activo y obstaculizar que la enzima catalice la reacción. Existen distintos tipos de inhibidores, como los inhibidores competitivos, los cuales se asemejan al sustrato y compiten con él por ocupar elsitio activo de una enzima. La unión del inhibidor con el sitio activo puede ser irreversible si se forman enlaces covalentes entre el inhibidor y la enzima; o irreversible si se forman enlaces relativamente débiles.
Por el contrario los inhibidores no competitivos se unen a la enzima en un lugar distinto al sitio activo y modifica la forma de ésta de manera que el sitio activo no pueda ajustarseal sustrato.
En el siguiente informe se observaran los parámetros cinéticos de la fosfataza alcalina con y sin la acción del fosfato diácido de sodio (inhibidor), dichos parámetros serán obtenidos a través de la ecuación de la recta y serán graficados para comparar sus resultados y discutir el tipo de inhibidor que utilizamos, viendo los cambios en relación a la velocidad de reacción versussustrato.
1- Obtener la velocidad de reacción y la concentración de sustrato con y sin inhibidor.
2- obtener los parámetros cinéticos de la fosfatasa alcalina con y sin inhibidor.
3- Valorar los parámetros cinéticos e identificar el tipo de inhibidor.
RESULTADOS
Con Inhibidor
Sin Inhibidor
Tabla 1: “ concentración de sustrato y velocidad de reacción con y sin inhibidor”.Gráfico 1: “1/velocidad de reacción sin inhibidor v/s 1/[S]”
Gráfico 2: “1/velocidad de reacción con inhibidor v/s 1/[S]”
Cálculo de Km (Sin inhibidor)
Cálculo de Km (Con inhibidor)
DISCUSION
El practico realizado en el laboratorio, al calcular los parámetros cinéticos de la fostasa alcalina con y sin la acción del inhibidor, se observa que ambos parámetros aumentan,SECCION EXPERIMENTAL
En primer lugar se reunió el material y se preparó una batería con 5 tubos de ensayo enumerados que correspondían a los tubos sin inhibidor,los cuales contenían 1 tubo blanco y 4 tubos con reactivos.
Se agregó con una pipeta agua destilada, con una concentración determinada para cada tubo, posteriormente se agrego 2 ml de tampón citrato 0,3 M (Ph= 8) ml en cada tubo, además seagregó con una micropipeta una concentración determinada de p-NPP de sodio 0,02 M a los tubos, a excepción del tubo blanco, para determinar la velociadad inicial de la fosfatasa Alcalina sin inhibidor. El tubo nº 1 contenía 0.6 ml de p-NPP de sodio + 2 ml de tampón citrato + 1.4 ml de agua destilada. El tubo nº 2 contenía 0.8 ml de p-NPP de sodio + 2 ml de tampón citrato + 1.2 ml de agua destilada.El tubo nº 3 contenía 1.0 ml de p-NPP de sodio + 2 ml de tampón citrato + 1.0 ml de agua destilada. El tubo nº 4 contenía 1.5 ml de p-NPP de sodio + 2 ml de tampón citrato + 0.5 ml de agua destilada. El tubo nº 5 contenía solo 2 ml de tampón citrato + 2 ml de agua destilada y se considero como tubo blanco.
Posteriormente se mezclaron los tubos y se agregó 0.1 ml de fosfatasa Alcalina (enzima)...
Tamara Bustamante; Valeria Garay; Lorena Nicoman; Francisca Rusque
copooa@hotmail.com
Pamela Fernanda Novoa Catalán
RESUMEN:
En el desarrollo de la actividad realizada en el laboratorio, se buscará la inhibición enzimática de la fosfatasa alcalina, con la acción del fosfato Diácido de sodio, donde a través de la absorbancia se obtendrá la velocidad de reacción cony sin la acción del inhibidor y junto con la concentración de sustrato, se obtendrán los parámetros cinéticos con y sin su acción, obtenidos por la ecuación de la recta para identificar y demostrar el tipo de inhibidor, a través de la representación gráfica.
Inhibidor; Fosfatasa Alcalina; parámetros cinéticos, velocidad de reacción, concentración sustrato.
INTRODUCCION Y OBJETIVOS
Existenfactores que alteran la actividad enzimática, como los inhibidores, los cuales son sustancias que retardan o detienen la reacción. La unión de un inhibidor puede impedir la entrada del sustrato al sitio activo y obstaculizar que la enzima catalice la reacción. Existen distintos tipos de inhibidores, como los inhibidores competitivos, los cuales se asemejan al sustrato y compiten con él por ocupar elsitio activo de una enzima. La unión del inhibidor con el sitio activo puede ser irreversible si se forman enlaces covalentes entre el inhibidor y la enzima; o irreversible si se forman enlaces relativamente débiles.
Por el contrario los inhibidores no competitivos se unen a la enzima en un lugar distinto al sitio activo y modifica la forma de ésta de manera que el sitio activo no pueda ajustarseal sustrato.
En el siguiente informe se observaran los parámetros cinéticos de la fosfataza alcalina con y sin la acción del fosfato diácido de sodio (inhibidor), dichos parámetros serán obtenidos a través de la ecuación de la recta y serán graficados para comparar sus resultados y discutir el tipo de inhibidor que utilizamos, viendo los cambios en relación a la velocidad de reacción versussustrato.
1- Obtener la velocidad de reacción y la concentración de sustrato con y sin inhibidor.
2- obtener los parámetros cinéticos de la fosfatasa alcalina con y sin inhibidor.
3- Valorar los parámetros cinéticos e identificar el tipo de inhibidor.
RESULTADOS
Con Inhibidor
Sin Inhibidor
Tabla 1: “ concentración de sustrato y velocidad de reacción con y sin inhibidor”.Gráfico 1: “1/velocidad de reacción sin inhibidor v/s 1/[S]”
Gráfico 2: “1/velocidad de reacción con inhibidor v/s 1/[S]”
Cálculo de Km (Sin inhibidor)
Cálculo de Km (Con inhibidor)
DISCUSION
El practico realizado en el laboratorio, al calcular los parámetros cinéticos de la fostasa alcalina con y sin la acción del inhibidor, se observa que ambos parámetros aumentan,SECCION EXPERIMENTAL
En primer lugar se reunió el material y se preparó una batería con 5 tubos de ensayo enumerados que correspondían a los tubos sin inhibidor,los cuales contenían 1 tubo blanco y 4 tubos con reactivos.
Se agregó con una pipeta agua destilada, con una concentración determinada para cada tubo, posteriormente se agrego 2 ml de tampón citrato 0,3 M (Ph= 8) ml en cada tubo, además seagregó con una micropipeta una concentración determinada de p-NPP de sodio 0,02 M a los tubos, a excepción del tubo blanco, para determinar la velociadad inicial de la fosfatasa Alcalina sin inhibidor. El tubo nº 1 contenía 0.6 ml de p-NPP de sodio + 2 ml de tampón citrato + 1.4 ml de agua destilada. El tubo nº 2 contenía 0.8 ml de p-NPP de sodio + 2 ml de tampón citrato + 1.2 ml de agua destilada.El tubo nº 3 contenía 1.0 ml de p-NPP de sodio + 2 ml de tampón citrato + 1.0 ml de agua destilada. El tubo nº 4 contenía 1.5 ml de p-NPP de sodio + 2 ml de tampón citrato + 0.5 ml de agua destilada. El tubo nº 5 contenía solo 2 ml de tampón citrato + 2 ml de agua destilada y se considero como tubo blanco.
Posteriormente se mezclaron los tubos y se agregó 0.1 ml de fosfatasa Alcalina (enzima)...
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