Inmuno enzayo

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Universidad La Salle
Escuela de Ciencias Químicas
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Laboratorio de Inmunología
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Redactor: José de Jesús López García
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Inmunoenzayo Enzimático-------------------------------------------------
INTRODUCCIÓN
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Inmunoensayo es una prueba que usa complejos de anticuerpo y antígeno como medio para generar un resultado perceptible. Un complejo anticuerpo-antígeno también es conocido como inmuno-complejo.

“Inmuno” se refiere a una respuesta inmunológica que hace que el cuerpo genere anticuerpos, y “ensayo” se refiere a una prueba.Por lo tanto, un
inmunoensayo es una prueba que utiliza inmuno-complejos cuando se unen los anticuerpos y los antígenos.

La técnica de ELISA es un ensayo inmunoenzimático ampliamente empleado en el área médica para la cuantificación de moléculas especialmente de aquellas que experimentan cambios en diferentes estados como pueden ser infecciones por bacterias, virus, hongos o parásitos o fasesactivas de enfermedades autoinmunes.
Los pasos generales para realizar una ELISA son:
1. Tapizado del pocillo con el antígeno o anticuerpo.
2. Adición de la muestra problema con la mezcla de antígenos o anticuerpos.
3. Unión del antígeno o anticuerpo específico al anticuerpo o antígeno tapizado en el pocillo
4. Lavado del pocillo para eliminar el exceso de antígeno o anticuerpo no unido5. Adición del anticuerpo secundario marcado con la enzima
6. Unión del anticuerpo secundario al antígeno o anticuerpo
7. Lavado del pocillo para eliminar el exceso de enzima no unida
8. Adición del substrato
9. Unión del substrato a la enzima
10. Desarrollo del color

Ventajas de la Técnica de ELISA:

1. La técnica del ELISA es una prueba rápida que permite analizarsimultáneamente un número elevado de muestras y obtener resultados en una hora aproximadamente.
2. Una vez que se dispone de los anticuerpos adecuados, la técnica es sencilla y barata.
3. No es necesario utilizar instalaciones o equipos complejos de laboratorio.
4. Todos los materiales y reactivos necesarios se pueden suministrar en forma de kit para su aplicación como prueba de campo.
Lainterpretación de los resultados es muy sencilla, objetiva y visual.

OBJETIVOS
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Conocer y aplicar un método que determine anticuerpos contenidos en suero contra moléculas de gran importancia biológica (IL6 e IL10)

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MATERIAL Y METODOLOGÍA-------------------------------------------------

Para ambos.
Se comenzó preparando la placa de Elisa es decir sensibilizándola con antígeno de captura para después dejarla reposar 1 día

Pasado este tiempo se enjuago 4 veces la placa con buffer para retirar los antígenos que no se lograron adherir, después se bloquearon huecos no específicos con 200 µl 1X diluyente de ensayo.

IL-10
Sedejo reposar durante 1 hora, una vez pasado este tiempo se continúo a realizar la curva estándar para IL-10 de la siguiente manera:

En 1,000 µl de la solución estándar en 250 pg/mL de la solución stock.

Después se hicieron las diluciones siguientes:

Figura A.- Curva estándar IL-10

IL-6
Se dejo reposar durante 1 hora, una vez pasado este tiempo se continúo a realizar la curva estándarpara IL-6 de la siguiente manera:

En 1,000 µl de la solución estándar en 500 pg/mL de la solución stock.

Después se hicieron las diluciones siguientes:

Figura B.- Curva estándar IL-6

Para Ambos:

Una vez realizada la curva estándar se lavo la placa 4 veces con buffer, para después agregar 100 µl de las muestras problema, se sello la placa y se incubo durante 2 horas.

Terminado...
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