Lab 1 Espectrofotometr A 1

“Año de la Diversificación Productiva y del Fortalecimiento de la Educación”
Asociación Universidad Privada San Juan Bautista
Facultad de Ciencias de la Salud
Escuela Profesional de Medicina Humana
III Ciclo
BIOQUÍMICA Y NUTRICIÓN
Laboratorio: N°1
“ESPECTROFOTOMETRÍA”

Alumno:
Farfán Aguilar, Arthur Daniel
Profesor:
García Calderón, Jack
Semestre:
2015 – I
Filial:
Chincha
2015INTRODUCCION
Casi todas las sustancias en solución tienen la capacidad de absorber en forma selectiva determinadas radiaciones luminosas unas más que otras dejándolas pasar. La longitud de onda en la que las moléculas de dicha sustancia absorbe con mayor intensidad la luz, se denomina “longitud de máxima absorción” o “lambda máximo”. Si consideramos que cada molécula absorbe una determinada cantidad de luz,la intensidad de la luz transmitida por una solución disminuirá en relación con el aumento del número de moléculas que se interpongan entre la fuente luminosa y el observador. Este número varía de acuerdo con la concentración del soluto y el espesor del recipiente que contiene la solución, estos factores están considerados en la “Ley de Lambert y Beer”, que rige los principios de laEspectrofotometría, leyes que en el presente informe serán estudiados.









GENERALIDADES

Se denomina Análisis Colorimétrico al conjunto de métodos de análisis cuantitativos que se fundamentan en la medición de la intensidad de la luz transmitida a través de una solución coloreada, ya sea que se trate de sustancias naturalmente coloreadas ò que se han hecho de tal calidad mediante reacciones químicasadecuadas. Cuando una haz de luz (luz incidente, Io) atraviesa una solución, una parte de la radiación queda absorbida por las moléculas del soluto coloreado, sufriendo una reducción de su intensidad (Luz transmitida, I), proporcional a la capacidad de absorción de dichas moléculas.






La longitud de onda en la que las moléculas de dicha sustancia absorbe con mayor intensidad la luz, se denomina“longitud de máxima absorción” o “lambda máximo”. Si consideramos que cada molécula absorbe una determinada cantidad de luz, la intensidad de la luz transmitida por una solución disminuirá en relación con el aumento del número de moléculas que se interpongan entre la fuente luminosa y el observador. Este número varía de acuerdo con la concentración del soluto y el espesor del recipiente que contiene lasolución, estos factores están considerados en la “Ley de Lambert y Beer”, que rige los principios de la Espectrofotometría y cuyas formas de expresión son:



CÁLCULO DE LA CONCENTRACIÓN DE UNA SOLUCIÓN PROBLEMA:

Para calcular la concentración de una solución problema con el empleo de un Espectrofotómetro, existen dos formas: - Método de la curva estándar o curva de calibración. - Factor decalibración. a) CURVA STANDARD.- Este método consiste en utilizar varios estándares de concentraciones conocidas y progresivas para luego construir un gráfico en un sistema de coordenadas en el que se colocan las lecturas en las ordenadas (Eje Y) y las concentraciones en las abscisas (Eje X). En la recta obtenida (Función lineal), se puede extrapolar la absorbancia o densidad óptica de la muestraproblema, hallando la concentración de la misma en el eje de las abscisas. b) FACTOR DE CALIBRACIÓN.- (Fc), El factor de calibración es un término que se relaciona con la concentración de una sustancia con su absorbancia, es decir la intensidad que absorbe una sustancia de concentración conocida (Standard o Patrón).
Así tenemos:



Donde:
Fc = factor de calibración.
A = absorbancia del tubostandard.
[Standard] = concentración del standard.
Con el factor de calibración se puede fácilmente determinar la concentración de una muestra desconocida o problema (MP), conociendo su absorbancia. Si la muestra problema y el standard son procesados de la misma manera (diluciones) se podrá usar directamente la siguiente fórmula:



Si la muestra problema sufre diluciones previas se encontrará el...