Laboratorio crecimeinto microbiano

Laboratorio microbiología general pruebas bioquímicas determinación de importantes grupos bacterianos

Objetivos:
 Conocer el uso de las pruebas bioquímicas para la identificación de microorganismos.
 Por identificar las diversas reacciones de acuerdo a los parámetros utilizados para la identificación.
 Desarrollar las diversas técnicas para pruebas bioquímicas.

Prueba MIO
Estaprueba permite identificar bacterias de acuerdo a su motilidad a la reacción de Indol a la descarboxilación de la ornitina.
Procedimiento
Se inocula el agar en punta hasta el fondo, inocular a 35ª C por 24 horas. Luego se le incorpora el medio reactivo de kovaks, donde se observara si se forma un halo de color. Dependiendo del color que se torne el halo se podrá determinar el resultado. Si elhalo es amarillo esto indica que es positivo al indol, si el halo es rojo esto indica que es negativo al indol.
Bacterias utilizadas: S. aureus y Salmonella.
Resultado
S. aureus: luego de incorporar el reactivo de kovaks, su halo se torna de color amarillo lo que indica que es positivo.
Salmonella: luego de incorporar el reactivo de kovaks, su halo se torna de color amarillo lo que indica que espositivo.
Imágenes

Prueba oxidasa
El objetivo de la prueba “Oxidasa” es buscar la presencia de la enzima Citocromo C oxidasa.
Procedimiento
En una placa petri esterilizada se divide en 2 donde se incorporan trozos de papel humedecido con reactivo de kovacs, luego de estar impregnado se le incorpora con la ayuda de el asa loop se incorpora la bacteria a utilizar. Tras unos 30 segundos seobserva si a ocurrido algún cambio.
Bacterias utilizadas: Salmonella, S. aureus, E. coli, Klebsiella.
Resultado
No se produjo un cambio de color ya que ninguna de las bacterias utilizadas eran de la clasificación de Pseudomonas y Neisseria. Ya que no se produjo el cambio de color porque para ser positivo debió haberse tornado rojo, lo cual no sucedió.
Prueba de la catalasa
El Objetivo esbuscar la presencia de la enzima catalasa
Procedimiento
Para esta prueba se utiliza porta objeto, donde con la ayuda de el asa loop se toma una muestra de cepa bacteriana, la cual se incorpora al porta objeto (sin ser fijada la bacteria). Luego con la ayuda de una pipeta Pasteur se agrega de 4 a 5 gotas de H2O2. Tras unos segundos se observa si han ocurrido cambios.
Bacterias utilizadas: E. coliy Klebsiella.
Resultado
Para el caso de E. coli luego de incorporación el H2O2 se observa que para esta prueba da positiva, ya que si burbujea es catalasa positiva.
Para el caso de Klebsiella luego de la incorporación de H2O2 se observa que para esta prueba da positiva, ya que si burbujea es catalasa positiva.
Para ambos casos dio positivo lo que quiere decir, que si existe la presencia dela enzima catalasa.

Pruebas IMViC.
Agar citrato
La utilización de citrato como única fuente de carbono es una prueba útil en la identificación de enterobacterias.
Procedimiento
Se inocula el agar inclinado en una sola estría en el pico. Utilizar un cultivo de 24 horas en un medio sólido y cuidando no arrastrar medio de cultivo, ya que se pueden producir falsos positivos por crecimiento apartir del medio de cultivo del inóculo. Incubar a 35°C durante 4 días. El ensayo es positivo cuando se observa crecimiento a lo largo de la estría, acompañado o no de un viraje del indicador al azul.
Resultados:
(+)Klebsiella al ser positivo este test aumenta su pH, cambiando el color del azul bromotimol desde verde azul, E. Coli (-).
Vogues Proskauer
En la prueba de Voges-Proskauer sedetermina la vía de fermentación del butanodiol descripta en la prueba de rojo de metilo. El acetil-metil-carbinol (o acetoína) es un producto intermediario en la producción de butanodiol. En medio alcalino y en presencia de oxígeno la acetoína es oxidada a diacetilo. Este se revela en presencia de alfa-naftol dando un color rojo-fucsia.
Procedimiento
Inocular el caldo RMVP con un cultivo puro de...