Laboratorio Enzimas

Introducción

Enzima, cualquiera de las numerosas sustancias orgánicas especializadas compuestas por polímeros de aminoácidos, que actúan como catalizadores en el metabolismo de los seres vivos. Con su acción, regulan la velocidad de muchas reacciones químicas implicadas en este proceso. El nombre de enzima, que fue propuesto en 1867 por el fisiólogo alemán Wilhelm Kühne (1837-1900).Algunas enzimas, como la pepsina y la tripsina, que intervienen en la hidrólisis de muchos tipos de proteínas, controlan muchas reacciones diferentes, mientras que otras como la ureasa, son muy específicas y sólo pueden acelerar una reacción. Otras liberan energía para la contracción cardiaca y la expansión y contracción de los pulmones. Muchas facilitan la conversión de azúcar y alimentos en distintassustancias que el organismo precisa para la construcción de tejidos, la reposición de células sanguíneas y la liberación de energía química para mover los músculos.

Objetivos

* Revisar el papel de las enzimas en los seres vivos.

* Explicar el efecto de la temperatura, pH, y la concentración de la enzima en la actividad enzimática.

Materiales
* 10 g de hígado fresco de res ode pollo
* 1 g de carne de pollo
* Una manzana
* Una papa
* Una zanahoria
* 1 bisturí o navaja de afeitar
* 1 marcador indeleble
* Solución amortiguadora de pH ácido (HCl 1N)
* Solución amortiguadora de pH neutro (H2O destilada)
* 23 tubos de ensayo por grupo de trabajo
* 1 pipeta de 1 mL
* Mortero y pistilo
* H2O destilada
* Termómetro
*Vaso químico de 500 mL
* Pinza para tubos de Ensayo
* Solución amortiguadora de pH básico (Na OH 1N)
* Papel de pH 1-14

Procedimiento

I. ACTIVIDAD ENZIMÀTICA
1. Tome 2 tubos de ensayo, marque uno de ellos como control positivo, y el otro como control negativo.
2. Mida 1 ml de hígado macerado con la pipeta. Inserte la pipeta en uno de los tubos de ensayo y baje la puntade la pipeta lo más posible hasta el fondo del tubo antes de verter el hígado. Si parte del hígado se adhiere a las paredes del tubo la cantidad disponible para la reacción, no será consistente entre sus experimentos.
3. Ponga 1 ml de puré de hígado en el otro tubo, usando el mismo método.
4. En el primer tubo de ensayo ponga 3 ml de agua destilada des ionizada. Describa los resultadosen la tabla de datos.
5. En el otro tubo de ensayo ponga 3mL de H2O2. Observe la reacción por varios segundos anotando la altura que suben las burbujas así como la velocidad a la que ocurre la reacción. A este nivel de burbujeo asígnele “4”. Este será el patrón que usará para evaluar las otras reacciones en esta experiencia.
6. De acuerdo con la Segunda Ley de la Termodinámica, la cantidadde energía disponible para realizar el trabajo disminuye en el curso de cualquier proceso. A menudo la energía no disponible para realizar trabajo se pierde en forma de calor.
7. Toque el tubo de ensayo con la mano para ver si se desprende calor la reacción.

II. EFECTO DE LA TEMPERATURA EN LA ACTIVIDAD ENZIMÀTICA.
1. Ponga 1 mL de hígado puro en 4 tubos de ensayo. Rotule cadatubo con el nombre de su grupo y estas temperaturas:
* Tubo 1: Temperatura de baño de hielo
* Tubo 2 : Temperatura ambiente
* Tubo 3: Temperatura de 37 º C
* Tubo 4: Temperatura de 100 º C
2. En cuatro tubos limpios adicionales ponga 3 ml de H2O2. Rotule cada tubo con el nombre del grupo y las temperaturas ya señaladas.
3. Deje los tubos de “temperatura ambiente” en lagradilla. Ponga el resto de los tubos en los baños correspondiente. Después de 4 minutos, use la pinza para tubos y saque los tubos de H2O2 al tubo correspondiente de hígado. Evalué la reacción de acuerdo con el patrón establecido arriba y registre los resultados.
4. Haga una grafica de tasa de actividad vs la temperatura.

III. EEFECTO DEL Ph EN LA ACTIVIDAD ENZIMATICA.
1. Rotule tres...