macro


MATERIAL Y MÉTODOS.

Medio de caldo nutritivo
Cultivo de B. Subtilis
Pipetas de 10
15 Tubos con tapón de baquelita estériles
15 Tubos con tapón de baquelita con solución salinaestéril para dilución
Perilla para pipetas de 10 ml
20 Tubos de ensaye
Pipeta de 0.1 ml
Pipetas de 5 ml
1 Embudo estéril
Biorreactor de 1 o 3 lt
Espectrofotometro UV/visible
Cuenta coloniasEstufa de incubación. Sol. estándar de glucosa 0.1 mg/ml
Sol. de fenol al 5%
Ac. sulfúrico concentrado



Procedimiento:

I. Desarrollo de la curva de crecimientomicrobiano.

1. Preparar un volumen tal de medio de cultivo liquido (caldo nutritivo) que sea equivalente al 70% -80 del volumen del biorreactor a usar.
2. Colocar el medio en el biorreactor yesterilizarlo a 15 lb/plg por 15 min.
3. Enfriar el medio
4. Sacar con una pipeta estéril 50 ml de muestra de medio que servirá de blanco, vaciar a un matraz estéril y refrigerar.
5. Preparar con elinoculo con 24 hrs de anticipación, el cual se preparará utilizando caldo nutritivo estéril y varias asadas del cultivo de B. subtilis , e incubar a 32-37 °C. El volumen del inoculo será deaproximadamente del 2-3% del volumen de medio del biorreactor.
6. Inocular el biorreactor con el cultivo anterior usando un embudo estéril y haciendo esta en la campana de flujo laminar.
7. Colocar el biorreactoren su lugar y conectarle todos los aditamentos necesarios para el monitoreo de los diferentes parámetros a medir y controlar.
8. Mezclar bien utilizando el agitador del biorreactor y tomar lamuestra # 1 que será la del tiempo To, la muestra se colocará en un tubo estéril con tapón de rosca para refrigerar u posteriormente determinarle su absorbancia (turbidez) a 560 nm.
9. Repetir elmuestreo a las 1, 2, 3, 4, 5, 6, 8, 10, 12 y 24 hrs.

II. Determinación de la turbidez del crecimiento microbiano.

1. Se enciende el espectrofotómetro y se deja calentar 20 min. se ajusta la...