Manual de criopreservación

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS MEDICOS

CRIOPRESERVACION DE CELULAS PROGENITORAS DE SANGRE PERIFERICA
INDICE

OBJETIVO ....................................................................................... 2

NORMAS 0PERATIVAS................................................................... 2

PROCEDIMIENTOS.......................................................................... 2CALCULOS DE VOLUMEN Y SOLUCION....................................... 2

MATERIALES.................................................................................... 2

PREPARACION DE LAS CELULAS.................................................. 3

PREPARACION DE LA SOLUCION CRIOPRESERVANTE............. 3CRIOPRESERVACION.............................................................................. 4

CONTROL DE CALIDAD................................................................... 4

DESCONGELACION.......................................................................... 4
I. OBJETIVO
Criopreservar células progenitoras de sangre periférica (CTSP) para reconstituir la hematopoyesis de pacientes que requieran de un trasplante autólogo de médula ósea, después dequimioterapia y/o radioterapia.
II. NORMAS OPERATIVAS
1. El paciente iniciará la cosecha de células tallo en la Unidad de Aféresis a las 8:00 AM del día programado.
2. El químico del Laboratorio del Servicio de Hematología deberá recibir de la Unidad de Aféresis el paquete celular en bolsa estéril y un paquete (bolsa) de plasma del mismo paciente.
3. Solo serán aceptados por el químico lospaquetes de células y plasma que lleguen:
• Con etiqueta membretada: nombre completo y peso en Kg del paciente, volumen en ml, número de leucocitos totales y fecha de obtención.
• Cerrados.
• Sin coágulos.
4. El Químico del Servicio de Hematología será el responsable de la manipulación y criopreservación de las CTSP, con la colaboración del Hematólogo responsable del transplante.
5. Lacriopreservación celular será realizada en el edificio de Investigación (laboratorio estéril)
III. PROCEDIMIENTOS
Deben realizarse en condiciones de esterilidad.
1. Limpiar con benzal y cloro y encender campana de flujo laminar 30 minutos antes de iniciar el procedimiento
2. Calcular volumen de plasma necesario para alcanzar una concentración celular de 80 millones por ml del paquete celular deacuerdo a la siguiente fórmula:
FÓRMULAS: VC = (L/80 x 106) x (V)
Donde:
VC = Volumen total de la bolsa que será criopreservada
L = Número de leucocitos/ml
V = Volumen de la bolsa que contiene el paquete celular
3. Calcular la cantidad total en ml de cada uno de los componentes de la solución criopreservante de acuerdo a las siguientes fórmulas:
Hespan = (45 x VC) / 100Albúmina = (32.5 x VC) / 100
RPMI= (11.25 X VC) / 100
DMSO = (11.25 x VC) / 100
4. Materiales:
4.1. Para eliminar desechos:
• Bolsa roja para desechos de tejido vivo
• Bolsa negra para desechos municipales
• Reservorio rojo para material punzo – cortante
4.2. Para la ejecución del procedimiento
• Bata y guantes estériles, cubre boca y gorro
• Campos estériles
• Isodine
4.3. Por cada bolsaa criopreservar
• 8 paquetes de gasas estériles
• 10 jeringas de 20 ml
• 5 jeringas de 10 ml
• 10 agujas amarillas
• 1 bolsa de criopreservación de 500 ml
• 1 bolsa de transferencia de 300 ml
• 1 bolsa crioprotectora
• 1 metriset
• 1 tubo con medio de cultivo de Pratz
• 4 tubos de estudio de criopreservación
• 1 botella con material refrigerante
• 3 Couplers (Baxter Fenwall samplingsite)
4.4. Químicos
• Hespan al 6%
• Albúmina humana al 25%
• Dimetil-sulfóxido (DMSO)
• RPMI
• Heparina 5 000 U
5. Anotar nombre del paciente y fecha en la bolsa de congelación, tubo de medio de cultivo y tubos de estudio de criopreservación.
6. Vestir quirúrgicamente y disponer los materiales estériles del punto 4.3 fuera de su bolsa protectora, sin contaminar, en el...