Medios de cultivo

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Laboratorio No. 2
Preparación de Medios de cultivo - Métodos de Siembra de Microorganismos
Cuestionario de entrada
1. ¿Qué es un medio de cultivo; de qué están compuestos principalmente; cómo se clasifican según su proporción de Agar y según su suministro de nutrientes?
2. ¿Cuál es la utilidad de los medios de cultivo y qué diferencia un caldo de un medio sólido?
Objetivos
1. Aprender lapreparación y manipulación de los medios de cultivo.
Materiales: frasco con medio de cultivo deshidratado, medio líquido y sólido, matraz o erlenmeyer de 500 mililitros , balanza, probeta, espátula, papel kraft, plancha de calentamiento, varilla de vidrio, agar nutritivo y cinta indicadora de pH.
Procedimiento: Para iniciar el desarrollo de la práctica debe previamente realizar un estudioatento de la teoría sobre: Medios de Cultivo y los vídeos: Preparación y medios de cultivo parte 1 y parte 2 .
Preparación de medio de cultivo
º Revise la etiqueta de los medios de cultivo, anote el nombre, la composición y forma de preparación.
º Realice los cálculos para preparar los siguientes volúmenes de medio de cultivo tanto líquido como sólido: 325, 356 ml, 1567 ml, 131 ml y 24 ml
ºPrepare en un erlenmeyer 325 mililitros de agar. De acuerdo a las indicaciones de preparación se utilizan 20 gramos de medio deshidratado por litro de agua. Recuerde para el cálculo se realiza una regla de tres:
20 gr....... | 1000 ml | X= (20 gr.x 325ml)/1000= 6.5 gr. |
X gr......... | 325ml | |

º Pese 6.5 gramos del agar deshidratado. Mida 325 mililitros de agua destilada con una probeta. Deesos 325 mililitros de agua destilada coloque la mitad en un erlenmeyer previamente lavado con agua destilada, para eliminar residuos de otras sustancias. El erlenmeyer debe ser de volumen superior a la cantidad que se va a preparar. Agregue los 6.5 gramos de agar deshidratado al agua contenida en el erlenmeyer y posteriormente adicione el resto del agua destilada. Mezcle con el agitador.
º Acontinuación lleve la preparación a disolver en la plancha de calentamiento, agite constantemente con ayuda de la varilla de vidrio hasta que ebulla para lograr la disolución total del Agar. Mida el pH con ayuda de cinta indicadora de pH. El rango de pH en este medio es de 7.0 a 7.5. Si se hace necesario la corrección del pH, añada al medio de cultivo preparado la cantidad adecuada de solución deácido clorhídrico o de hidróxido sódico según el caso.
º Tape la boca del erlenmeyer con un tapón de papel kraft y selle con cinta de enmascarar. Si las normas de preparación no indican otra cosa, la esterilización se lleva a cabo en autoclave, a 121 grados centígrados, durante 15 minutos.
º Esterilizado el medio deje enfriar aproximadamente a 45°C.
º Proceda a servir el medio en presencia delmechero y en cajas de Petri, previamente esterilizadas. Las burbujas de aire en la superficie de la placa se eliminan “abanicando” brevemente la superficie con la llama no luminosa de un mechero Bunsen. Deje enfriar hasta que solidifique.
º A continuación realice la prueba de esterilidad que consiste en llevar los medios a incubar a 37 grados centígrados durante 12 o 24 horas. Esta prueba seevalúa por la presencia o ausencia de crecimiento posterior a la incubación. Las placas con medio de cultivo y el caldo preparado son claros e incoloros hasta con una tonalidad amarillenta.
º Prepare caldo nutritivo para tal fin solamente se emplean 8 gramos de Agar deshidratado por litro de agua. Realice la preparación de la misma manera. Dispense el caldo directamente en los tubos con tapa rosca.Posteriormente lleve los tubos con caldo a esterilizar en autoclave. No olvide que cuando se va a esterilizar medios directamente en los tubos estos no deben tener la tapa ajustada. Finalmente tenga en cuenta que para preparar Agar inclinado en tubo, solo cambia el momento en que se pone a solidificar ya que los tubos deben colocarse sobre una pipeta para lograr que se forme el pico de agar...
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