Medios De Cultivo

3.2) MEDIOS DE CULTIVO:
3.2.1) agua peptonada:
Uso:
Medio utilizado como diluyente y para el enriquecimiento bacteriano a partir de alimentos y otros materiales de importancia sanitaria.
Fundamento:
Medio de enriquecimiento no selectivo, en el cual la peptona proporciona nutrientes necesarios para el desarrollo microbiano y el cloruro de sodio mantiene el balance osmótico. Permite recuperarcélulas de entero bacterias dañadas por procesos fisicoquímicos a los que ha sido sometido el alimento. Además puede ser utilizado como diluyente de muestras en reemplazo de solución fisiológica y como media base para la fermentación de hidratos de carbono. En este último caso se debe adicionar el indicador de Andrade y el hidrato de carbono en cuestión en concentración final al 1%.
FÓRMULA (engramos por litro)
Peptona de carne 10.0
Cloruro de sodio 5.0
PH final: 7.2 ± 0.2

INSTRUCCIONES
Suspender 15 g del polvo en 1 litro de agua purificada. Mezclar calentando hasta ebullición durante 1 minuto. Distribuir en recipientes apropiados. Esterilizar en autoclave a 121°C durante 15 minutos.
Almacenamiento:
Medio de cultivo deshidratado a 10-35 ºC.
Medio de cultivo preparado a 2-8 ºC

3.2.2)Lauril Sulfato Caldo:
Medio recomendado por A.P.H.A. para detección y recuento de coliformes en aguas, aguas residuales y alimentos.
Fundamento 
Medio rico en nutrientes, que permite un rápido desarrollo de los microorganismos fermentadores de la lactosa, aún de los fermentadores lentos.
La triptosa es la fuente de nitrógeno, vitaminas, minerales y aminoácidos, la lactosa es el hidrato de carbonofermentable, las sales de fosfato proveen un sistema buffer, y el cloruro de sodio mantiene el balance osmótico
Es un medio selectivo, ya que el lauril sulfato de sodio inhibe el desarrollo de la flora acompañante.
Por la fermentación de la lactosa, se produce ácido y gas, éste último se evidencia al utilizar las campanas Durham.
Formula:
Fórmula (en gramos por litro)
Instrucciones
  Triptosa20.0
Suspender 35,6 g del polvo en 1 litro de agua destilada. Dejar reposar 5 minutos. Calentar a ebullición hasta la disolución total. Distribuir en tubos conteniendo tubos de fermentación. Esterilizar en autoclave durante 15 minutos a 121°C.
  Lactosa
5.0

  Cloruro de sodio
5.0

  Lauril sulfato de sodio
0.1

  Fosfato dipotásico
2.75

  Fosfato monopotásico
2.75

pH final: 6.8 ± 0.2

Siembra
Pararecuento de coliformes totales, técnica del Número Mas Probable: 
a.- Para el análisis de muestras fluidas como el agua, sembrar por triplicado: 10 ml en caldo doble concentración y 1ml y 0,1 ml en caldo simple concentración.
Número 
de tubos
Volumen de la muestra
Volumen de medio
Concentración 
del medio
3
10 ml
10 ml
Doble
3
1 ml
10 ml
Simple
3
0.1 ml
10 ml
Simple
b.- Para muestras sólidas(alimentos, cosméticos, fármacos), efectuar diluciones seriadas 10-1, 10-2 y 10-3 y sembrar cada dilución por triplicado en medio de cultivo simple concentración. 
Número 
de tubos
Dilución dela muestra
Volumen de la muestra
Volumen de medio
Concentración 
del medio
3
10-1
1 ml
10 ml
Simple
3
10-2
1 ml
10 ml
Simple
3
10-3
1 ml
10 ml
Simple

Incubación:
Incubar los tubos 24-48 horas a 35-37 °C.Resultados: 
Considerar como positivos aquellos tubos que presentan gas.
Microorganismos
Crecimiento
Producción
de gas
Enterobacter aerogenes
Bueno a excelente
+
Escherichia coli ATCC 25922
Bueno a excelente
+
Salmonella typhimurium ATCC 14028
Bueno a excelente
-
Staphylococcus aureus ATCC 25923
Inhibido
Inhibido

Características del medio
Medio preparado: ámbar claro a ligeramente opalescente. Si seconserva en frío, generalmente flocula o forma precipitado.
Almacenamiento:
Si se conserva entre 25-30 ºC o estufa de incubación a 35-37 ºC permanece claro.
3.2.3) E. C. Medio.
Medio utilizado para el recuento de coliformes totales, coliformes fecales y Escherichia coli en agua, alimentos y otros materiales.
Fundamento 
El contenido de lactosa en este medio, favorece el crecimiento de bacterias...