Metabolismo

La glucolisis (o glicólisis) es una vía metabólica universal. En ella se produce piruvato a partir de glucosa (en relación 2:1) y una serie de intermediarios. Omitiendo al ADP/ATP en este particular,la reacción total podría considerarse como la transferencia de dos hidruros de la glucosa a dos moléculas de NAD+ (figura 1).
Como tal coenzima se encuentra sólo en cantidades catalíticas, esnecesario regenerarla (reoxidarla) para que el proceso no se suspenda, de modo que en condiciones aeróbicas el NADH formado es reconvertido a NAD+ por oxigeno molecular a través de la cadena respiratoria.Esto no es posible en condiciones anaeróbicas: allí la reoxidación se efectúa cuando el piruvato se convierte en acetaldehído, y luego en alcohol.
Las levaduras, son hongos unicelulares anaeróbicosque regeneran el NAD+ mediante la descarboxilación del ácido pirúvico y la reducción del acetaldehído resultante, generándose así etanol y CO2, algo que ha sido aprovechado para producir bebidasalcohólicas espumosas, como sucede con la cerveza o la champaña.

OBJETIVOS
En esta práctica se busca demostrar la participación del piruvato, acetaldehído y CO2 en la fermentación de azúcares en causadapor la levadura.
Los dos primeros metabolitos se encuentran presentes en muy bajas concentraciones, por tanto, para demostrar su participación, se debe impedir su transformación en otroscompuestos: en soluciones ligeramente alcalinas, el piruvato se acumula y su presencia se puede demostrar por la reacción con 2,4-dinitrofenilhidrazina. Para evitar que el acetaldehído sea reducido a etanol, seadiciona bisulfito de sodio al medio de cultivo. Posteriormente su presencia se puede revelar en la formación de un complejo azul con el nitroprusiato de sodio.

1. Formación de piruvato a partirde glucosa
Adicione en un tubo pyrex grande 5 mL de solución de glucosa y adicione 5 mL de solución AGITADA de levadura en solución de buffer de fosfato (0,1 M) a pH 8,5. Coloque el tubo en el...