Microscopio protistas y algas

UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO
FACULTAD DE CIENCIAS
USO DEL MICROSCOPIO ÓPTICO E ILUMINACIÓN KÖHLER

INTRODUCCIÓN
Desde su creación por Antoni van Leeuwenhoek, el microscopio ha sido un objeto preciado en la investigación biológica. Un microscopio se encuentra limitado totalmente ante sus especificaciones técnicas; más allá de sus cualidades ópticas no se puede llegar, por eso esnecesario aprovechar íntegramente el recurso que un microscopio nos brinde (Stehli, 1955). Optimizando el uso del microscopio se pueden lograr mejores observaciones y, con ello, se pueden llevar a cabo hallazgos más detallados.
Figura 1. Izquierda: movimiento de los tornillos de enfoque, macrométrico y micrométrico; centro: enfoque con tornillo macrométrico; derecha: enfoque fino con tornillomicrométrico (Cole, 2008).
Figura 1. Izquierda: movimiento de los tornillos de enfoque, macrométrico y micrométrico; centro: enfoque con tornillo macrométrico; derecha: enfoque fino con tornillo micrométrico (Cole, 2008).
Una de las técnicas más difundidas es la llamada “iluminación Köhler” o “iluminación de campo claro”; la cual consiste en concentrar los haces emitidos por la fuente luminosa en elplano del objeto a observar para lograr una iluminación más intensa, además de mejor contraste y resolución (Ross & Pawlina, 2008; Freifelder, 1981). En algunos microscopios ya viene hecha esta calibración y no es necesario realizar la iluminación Köhler; en otros casos sí es necesario. El objetivo de esta práctica es aprender el manejo adecuado del microscopio óptico y usar la iluminaciónKöhler.
MATERIAL Y MÉTODO
Se utilizó una muestra de agua del lago de Xochimilco, México, D.F., la cual fue colocada entre porta y cubreobjetos usando pipeta Pasteur.
PREPARACIÓN DEL MICROSCOPIO
Para el uso del microscopio se bajó la platina hasta su menor nivel y se colocó el objetivo de menor aumento en posición de empleo. La preparación se colocó sobre la platina, sujetando con las pinzasmetálicas.
ENFOQUE
Estando esto listo, se procedió a enfocar el objeto con el objetivo de menor aumento disponible (generalmente 4x, 5x o 10x). Mientras se miraba directamente hacia el extremo del objetivo se fue acercando el objetivo a la preparación, llegando a un punto máximo donde el objetivo no tocara la preparación. Luego se ajustaron los oculares a la vista del observador y, mirando a través de losoculares, se separó lenta y cuidadosamente el objetivo de la preparación usando el tornillo macrométrico, hasta obtener una imagen ligeramente nítida. Con el tornillo micrométrico se realizó el enfoque fino (Figura 1).

ILUMINACIÓN KÖHLER
Estando enfocada la preparación se cerró totalmente el iris del diafragma de campo y se aumentó su apertura hasta que el polígono que se observaba en elmicroscopio tuvo un tamaño medio (Figura 2). Con la perilla del condensador se subió y bajó cuidadosamente el condensador hasta lograr una iluminación que permitiera ver la imagen lo más nítida posible (Figura 3). Después, con ayuda de las perillas de control X y Y, se centró el polígono en el campo visual (Figura 4). Finalmente se abrió el iris del diafragma hasta completar el campo visual (Figura5).

OBSERVACIÓN CON DIFERENTES OBJETIVOS
Realizada la calibración, se observó la preparación, procediendo desde el objetivo de menor aumento, hasta aquel de mayor aumento (incluyendo el objetivo de inmersión, 100x), procurando siempre realizar la rotación de los objetivos utilizando el revólver, no empujando los objetivos y siempre en sentido ascendente de acuerdo al aumento de los objetivos(depende del modelo de microscopio utilizado si es hacia derecha o izquierda).
Generalmente, al hacer cambio de objetivos, la imagen debería estar casi enfocada y sólo es necesario hacer enfoque fino con el tornillo micrométrico. De no ser así, es preferible volver a realizar el enfoque con el objetivo de menor aumento a arriesgarse a incrustar el objetivo en uso a la preparación, mancharlo con...