Microscopio

El microscopio de contraste de fases:  permite observar células sin colorear y resulta especialmente útil para células vivas. Este aprovecha las pequeñas diferencias de los índices de refracción en las distintas partes de una célula y en distintas partes de una muestra de tejido. La luz que pasa por regiones de mayor índice de refracción experimenta una deflexión y queda fuera de fase conrespecto al haz principal de ondas de luz que pasaron la muestra. Aparea otras longitudes de onda fuera de fase por medio de una serie de anillos ópticos del objetivo y del condensador, anula la amplitud de la porción fuera de fase inicial del haz de luz y produce un contraste útil sobre la imagen. Las partes oscuras de la imagen corresponden a las porciones densas del espécimen; las partes claras de laimagen corresponden a porciones menos densas. Por lo tanto estos microscopios se utilizan para observar células vivas, tejidos vivos y cortes semifinos no coloreados.
Microscopia de contraste de fases e interferencia de Nomarski.

Las células vivas se pueden observar con nitidez en un microscopio de contraste de fases o de contraste de fases interferencial.

La posibilidad de que algunoscomponentes de la célula puedan perderse o distorsionarse durante la preparación de las muestras no ha dejado de preocupar a los especialistas en microscopia. La única solución a este problema es examinar las células mientras aún están vivas, sin ningún tipo de fijación ni congelación. Para este propósito son útiles microscopios con sistemas ópticos especiales.
Cuando la luz pasa a través de unacélula viva, la fase de la onda luminosa varía en relación al índice de refracción de la célula: la luz que pasa a través de una zona relativamente gruesa o densa de la célula, como por ejemplo el núcleo, se retrasa y su fase queda desplazada de forma correspondiente respecto a la de la luz que ha pasado a través de una región adyacente de citoplasma, más fina. El microscopio de contraste de fases yel microscopio de contraste de fases interferencial aprovechan los efectos de interferencia que se producen cuando se combinan estos dos grupos de ondas, creando de esta forma una imagen de la estructura celular. Ambos tipos de microscopios ópticos se utilizan habitualmente para visualizar células vivas.
* 1930 Labedeff :  Diseña primer microscopio de contraste interferencial.
* 1932Frits Zernike : Inventa microscopio de contraste de fases.
* 1952 Nomarski : Inventa y patenta el sistema de contraste Interferencial que lleva su nombre.
* 1953 Premio Nobel de Física otorgado a Zernike.
Objetivo:
La microscopia de contraste de fases y la del microscopio de interferencia nos dan la posibilidad de observar células vivas y sin ninguna preparación , ya que al realizar otrosprocedimientos existe la posibilidad de que algunos de sus componentes puedan perderse o distorsionarse por métodos como la fijación, coloración, congelación, y otros, así, estos instrumentos ópticos ayudan a resolver el problema.

Principio de la microscopia de contraste: Las células vivas son transparentes a la luz visible, por lo tanto los rayos de luz pasan a través sin sufrir pérdidas enintensidad.
La luz transmitida a través de las células vivientes, sin embargo, encuentra a su paso, regiones de índices de refracción diferentes, y diferentes grosores y/o densidades, lo que es capaz de alterar su velocidad y su dirección. En la Figura 1 se da la representación esquemática en donde dos regiones adyacentes de una misma célula, A y B, de un diferente grosor, t1 y t2 y con diferentesíndices de refracción, n1 y n2, son atravesadas por un rayo luminoso. Las variaciones en grosor e índices de refracción son capaces de producir una diferencia en el curso óptico de la luz transmitida por las dos regiones. En este caso específico, le toma más tiempo pasar a la luz a través de la fracción B, cuyo índice de refracción es mayor (n2) y por lo tanto esta retrasada la onda del rayo...