Monografia

I.DEDICATORIA
Quiero dedicarle este trabajo
A Dios que me ha dado la vida y fortaleza
para terminar este proyecto de investigación,
A mis Padres por estar ahí
Cuando más los necesité y por apoyarme
en los momentos más difíciles.
II.INDICE
DEDICATORIA……………………………………………………………….3
INDICE………………………………………………………………………...4
INTRODUCCION…………………………………………………….……….………5
CAPITULO I
MÉTODOS DECUANTIFICACION DE PROTEINAS….…….………………..…6
Método Kjeldahl …………..…………………………………………….….…….7
Método de Biuret ……………………………………….………….………..…..15
Método de Bradford …………………………………...………………….……..21
Método de BCA……………………..……………………………….………......22Metodo de Lowry…………………………………………………………………22
CAPITULO II
Conclusiones………………………………………………………………..……23
Bibliografia…………………….………………………………………………….24Anexos………………………………………………………..……….……….....25
III.INTRODUCCION
La importancia de la cuantificación de las proteínas es del todo trascendental no solo en el campo de la biología, sino en los laboratorios de investigación para la industria alimentaria, farmacéutica y biotecnológica en general. A lo largo de los años se han ido creando varios métodos para esta cuantificación, siendo el método de Kjeldahl uno delos más antiguos, el uso del método adecuado depende de cinco criterios:
La cantidad total de proteína presente en la muestra
La concentración de la proteína
La especificidad del método
La presencia de otras sustancias que pudieran interferir
La facilidad y reproducibilidad del método.
En el presente trabajo daremos a conocer algunos de los métodos más conocidos para la cuantificaciónde proteínas.
CAPITULO I
MÉTODOS DE CUANTIFICACION DE PROTEINAS
Existen diferentes métodos para la cuantificación de proteínas. Muchos de estos métodos se basan en: a) la propiedad intrínseca de las proteínas para absorber luz en el UV, b) para la formación de derivados químicos, o c) la capacidad que tienen las proteínas de unir ciertos colorantes. En la Tabla I se recogen los métodos másusados así como sus respectivas sensibilidades
Cada uno de estos métodos tiene sus ventajas e inconvenientes, los cuales resaltamos en la TABLA II.
TABLA I. PRINCIPALES MÉTODOS PARA LA CUANTIFICACIÓN DE PROTEÍNAS Y SUS RANGOS DE SENSIBILIDADMétodo Rango de Sensibilidad (μg) Coeficiente de extinción o Calculo de la concentración
Métodos de absorción    
A280 100-3000 E280 = 1mL/mg cm
A205 3-100E250 = 31 mL/mg cm
A280 - A260 100-3000 Proteína (mg/mL) = (1.55A280 - 0.76A280)
A235 - A280 25-700 Proteína (mg/mL) = (A235 - A280)/2.51
A224 - A236 5-180 Proteína (mg/mL) = (A224 - A236)/0.6
A215 - A225 2-45 Proteína (μg/mL) = 144(A215 - A225)
Métodos derivados calorímetros    
Biuret 1000-10000 E545 = 0.06 mL/mg cm
Lowry 25-100 a 500 nm Usar curva estándar
2-30 a 660 nm  
1-2 a 750 nm  Bradford 1-15 E595 = 81 mL/mg cm
BCA 0.5-10 Usar curva estándar
Métodos Derivados Fluorímetros    
o-flalaldehido 1-5 λexcitación a 240 nm Usar curva estándar
emisión a 475 nm (Reyes, EF: Galván AC. 2006)
TABLA II. PRINCIPALES MÉTODOS PARA LA CUANTIFICACIÓN DE PROTEÍNAS, PRINCIPALES VENTAJA E INCONVENIENTES.
Método Ventajas Inconvenientes
Métodos de absorción No se pierden las muestrasInterfieren muchos compuestos que absorben en el UV
Métodos derivados calorímetros    
Biuret Bastante específico para proteínas Tiene poca sensibilidad
  Muestra pocas interferencias  
  Es barato  
Lowry Tiene bastante sensibilidad No todas las proteínas reaccionan igual Muestra interferencias como detergentes no iónicos, sulfato amónico, etc.
Bradford Muy sensible Muestrainterferencias con detergentes
BCA Es el método mas sensible  
  Es el que muestra menos interferencias  
Métodos derivados fluorímetros    
o-flalaldehido Muy sensible La interferencia de aminas contaminantes en la muestra
    No todas las muestras reaccionan igual
(Reyes, EF: Galván AC. 2006)
1.1 MÉTODO KJELDAHL
En 1883 el investigador danés Johann Kjeldahl desarrolló el método más usado...