Museo

III. ETAPAS DEL PROCESO DE INFECCIÓN
Adsorción y penetración Lección 4.
• Curva de multiplicación de un solo paso (Ellis y Delbruck, 1939) • Experimento de Alfred Hershey y Martha Chase (1952) • Etapas del proceso de infección • Etapa de adsorción y etapa de penetración en Bacteriófagos • Etapa de adsorción, penetración y desnudamiento en Virus de animales. (Transporte del genoma vírico alnúcleo de la célula ) - Adenovirus - Poliovirus/Rhinovirus - Influenza Virus A - Retrovirus

Virología

Curva de multiplicación del fago T4 (Ellis y Delbruck, 1939)
La clave de este experimento es que todas las bacterias sean infectadas al mismo tiempo

Retirar los fagos que no se hayan unido a las bacteria Tiempo corto de infección

Se cogen muestras a distintos tiempos (Centrifugamos)En cada tiempo se cogen 2 muestras:

M1 Se centrifuga y estudiamos si en el sobrenadante hay fagos [=VIRUS EXTRACELULARES]

M2 Lisamos las células con cloroformo y estudiamos si existen fagos [=VIRUS TOTALES]

1000

Virus extracelulares Virus totales u.f.p./ célula
100

PERIODO DE LATENCIA 10 PERIODO DE ECLIPSE

ETAPA DE LIBERACIÓN

PRODUCCIÓN VÍRICA

INFECCIÓN
10 20 ACUMULACIÓNINTRACELULAR 30

Virología

Tiempo (min)

Experimento de Hershey y Chase (1952)
Marcaje del DNA de los fagos con
32P

El ADN del fago incorpora 32P El fago infecta a la bacteria Lisis de la bacteria ADN del fago marcado con 32P

Se mezclan las bacterias y los fagos
32P-ADN

En el sobrenadante aparece muy poca cantidad de 32P Lisis de la bacteria
fug a

Se c

ent riMediante agitación se separan los virus que están unidos a la superficie celular

32P-DNA

en la progenie del fago

Marcaje de las proteínas de la cápsida de los fagos con 35S
La mayoría del 35S se encuentra en el sobrenadante

Las proteínas de la cápsida incorporan 35S

35S-cápsidas

Se c

ent ri

Lisis de la bacteria
fug a

El fago infecta a la bacteria

Lisis de la bacteriaCápsidas marcadas con 35S

Se mezclan las bacterias y los fagos Mediante agitación se separan los virus que están unidos a la superficie celular

Ninguna de las cápsidas de la nueva progenie de fagos está marcada con 35S
Virología

Etapas del proceso de infección
• Adsorción • Penetración (Desnudamiento en Virus de Animales) • Expresión de la información génica • Replicación • Ensamble,maduración • Liberación • ETAPA DE ADSORCIÓN-PENETRACIÓN

Bacteriófagos
Receptores • Pared celular: Lipopolisacáridos (LPS) Proteínas • Pili • Flagelos • Cápsula

Estructura del lipopolisacárido en Salmonella
Estirpe
Smooth (Estirpe silvestre) Polisacárido O-específico Núcleo polisacarídico Lípido A

rfc

rfb T

rfa H

gal E

Virología

rfa G

Sensibilidad de distintos mutantesen LPS de Salmonella a varios a fagos
Fagos P22 FelixO 6SR C21 Br60 Br2 Liso (wt) rfc rfb T rfa H gal E rfa G S R R R R R S S S R R R R R S R R R R R R S S S R R S S S S R R S S R S

Bacteriófago T4
Proteínas que forman la cápsida (gene product, gp)

Cabeza 23, 24,hoc, soc,IP I, II, III Alt, DNA

Tubo central 19 Cola Vaina 18

Cuello 20, 13, 14 wac Fibras de la cola 34, 35, 36, 37Espinas o fibras cortas 12

Placa basal 7, 8, 9, 10, 11, 6, 25, 53, 5, 27, 26, 28, 48, 54 3 y 15 (sellan el tubo y la vaina)

Imágenes CryoEM

Espinas (gp12)

Virología

Adsorción del Fago T4 • Unión reversible

Proteínas que forman la placa basal y el tubo central

Espinas o fibras cortas (gp12)

Forma hexagonal de la placa basal • Unión irreversible Estructura de la colacontraída Forma de estrella de la placa basal

Vista desde la base Vista de lado

Virología

Vista desde la base y con inclinación Sección transversal

Fotografía al microscopio electrónico del fago T4 adsorbido a la pared celular de E. coli . La flecha señala cómo el tubo de una de las partículas de T4 atraviesa la pared celular de la bacteria

Ejemplos de la adsorción de otros fagos...