Observación de bacterias

Observación de Bacterias
Introducción:
Para la observación de bacterias, estas pueden ser examinadas de dos formas:
Frescas y vivas
Muertas y teñidas
Sin embargo en microbiología suelen ser más comunes la observación de microorganismos muertos y coloreados por tinción simple, diferencial o las tinciones de estructuras.
La mayoría de los colorantes que se utilizan para la tinción estánconstituidos por sales en las cuales uno de los iones presenta color, el cual se fija en la superficie de las bacterias que por lo general están cargadas negativamente.
Sin embargo existen situaciones excepcionales por ende hay dos tipos de colorantes
Básicos cuando el color reside en el ion positivo
Ácidos cuando el color reside en el ion negativo
Los colorantes son compuestos orgánicos quetienen afinidad con determinado componente celular (Madigan et al, 2003), esto es muy útil para el estudio de la microbiología y muy usado también por ello es elemental el aprendizaje de los procesos de tinción simple en el estudio de esta rama biológica.
Objetivo:
Observar las diferentes formas, tamaños y agrupaciones que presentan los organismos aplicando un método simple de tinción.Materiales:

Muestra Conteniendo Bacterias
Asa de kölle
Lámina porta objeto
Mechero de alcohol
Piseta con agua
Aceite de inmersión
Colorantes básicos: Cristal Violeta, Azul de metileno y Carbolfucsina
Soporte para tinción
Papel secante
Metodología:
Las tinciones más simples se realizan sobre preparaciones previamente secadas. Sobre un porta con una suspensión de microorganismos previamentesecada y fijada, si la muestra no es fijada esta puede perderse durante el proceso de tinción; debe recordar que durante el procedimiento de fijación se mata al organismo, coagula el protoplasma celular y provoca su adhesión a la lámina de vidrio. Luego se derrama una pequeña cantidad de una solución diluida del colorante y se mantiene el contacto durante uno o dos minutos; a continuación, se lavavarias veces con agua y se seca.
Resultados:
Muestras
Forma
Asociación bacteriana
Bacillus sp
Bacilo
Estreptobacilo
Escherichia coli
Cocobacilo
Sin asociación
Staphylococcus aureus
Coco
Estafilococo

Tinción de Bacillus sp, Escherichia coli y Staphylococcus aureus con cristal violeta
Utilizando como colorante al cristal violeta se pudo teñir las muestras de Escherichia coli,Bacillus sp y Staphylococcus aureus en 30 segundos. Observándose lo siguiente y con una coloración violeta:

Bacillus sp

Escherichia coli






Staphylococcus aureus

Tinción de Bacillus sp con Azul de Metilo
A la muestra de Bacillus sp el colorante azul de metileno lo tiño de un color azul, demorándose en teñirla de 3 a 5 minutos aproximadamente.

Tinción de Staphylococcus aureusCabofucsina
Utilizando como colorante a la carbofucsina se pudo teñir la muestra de Escherichia coli en 15 segundos. Se observaron los cocobacilos presentando un color rosado intenso y que además no formaban asociaciones bacterianas.

Discución:
EL cristal violeta es un compuesto orgánico que posee en su estructura química un grupo cromóforo, del que depende su propiedad de colorear, y otro grupoautocromo ácido que le concede la capacidad de disociación eléctrica (Delfino, 1985). Como el cristal violeta es un colorante básico tiene afinidad por las bacterias, ya que estas generalmente tienen la superficie cargada negativamente cuando el Ph del ambiente es casi neutro (Negroni, 2009) y así ser teñida. También se observó que la reactividad del cristal violeta es relativamente media de los 3colorantes usados, tanto el Bacillus sp y Staphylococcus aureus al ser bacterias Gram positivas presenta una pared compuesta de ácido teicoico, polímero de unidades repetidas de ribotol, el cual le da la carga negativa su pared (Picher, 2011), mientras que la Escherichia coli a ser una Gram negativa presenta una pared celular formada por lipopolisacáricos (LPS), lipoproteínas y fosfolípidos con...