Ovoalbumina

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UNIVERSIDAD NACIONAL DEL CALLAO

FACULTAD DE INGENIERIA PESQUERA Y ALIMENTOS
ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERIA DE ALIMENTOS

CUANTIFICACIÓN DE LA OVOALBÚMINA MEDIANTE EL FOTOCOLORÍMETRO MERK SQ – 118

PROFESORA:
* Blga. MS. C. ALICIA DECHECO EGUSQUIZA

CURSO:
* BIOQUIMICA

INTEGRANTES:
* IPORRE TIBURCIO, MIGUEL ANGEL
* MELENDEZ GARCÍA, JUAN GIANFRANCO

CICLO: III2010
CUANTIFICACIÓN DE LA OVOALBUMINA MEDIANTE EL FOTOCOLORÍMETRO MERK SQ – 118
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INTRODUCCIÓN

ESPECTROSCOPIA DE ABSORCIÓN

Desde hace muchos años se ha usado el color como ayuda para reconocer las sustancias químicas; al reemplazar el ojo humano por otros detectores de radiación se puede estudiar la absorción de sustancias, no solamente en la zona del espectro visible, sinotambién en ultravioleta e infrarrojo.

Se denomina espectrofotometría a la medición de la cantidad de energía radiante que absorbe un sistema químico en función de la longitud de onda de la radiación, y a las mediciones a una determinada longitud de onda.

La teoría ondulatoria de la luz propone la idea de que un haz de luz es un flujo de cuantos de energía llamados fotones; la luz de unacierta longitud de onda está asociada con los fotones, cada uno de los cuales posee una cantidad definida de energía.

TRANSMITANCIA

La figura muestra un haz de radiación paralela antes y después de que ha pasado a través de una capa de solución que tiene un espesor de b cm. y una concentración c de una especie absorbente.

Como consecuencia de interacciones entre los fotones y las partículasabsorbentes, la potencia del haz es atenuada. La transmitancia T de la solución es entonces la fracción de la radiación incidente transmitida por la solución:

La transmitancia se expresa a menudo como porcentaje:

Absorbancia

La absorbancia A de una solución se define mediante la ecuación:

La mayor parte de los trabajos analíticos se realizan con soluciones de manera que vamos adesarrollar la relación que existe entre la concentración de la solución y su capacidad de absorber radiación.

Medición de Transmitancia y Absorbancia

La transmitancia y la absorbancia se miden en un instrumento llamado espectrofotómetro, la solución del analito se debe contener en algún recipiente transparente, tubo o celda.

Como se ve en la representación, ocurre reflexión en las interfases:aire-pared, tanto como en la pared-solución. La atenuación del haz resultante es sustancial. Además, la atenuación de un haz puede ocurrir por dispersión de las moléculas grandes y a veces por absorción de las paredes del recipiente.

Para compensar estos efectos, la potencia del haz transmitido por la solución del analito es comparada comúnmente con la potencia del haz transmitido por una celdaidéntica que contiene solamente solvente. Una absorbancia experimental que se aproxima mucho a la absorbancia verdadera se obtiene con la ecuación.

Los espectrofotómetros, están a menudo, equipados con un dispositivo que tiene una escala lineal que se extiende de 0 a 100%. De manera de hacer tal instrumento de lectura directa en porcentaje de transmitancia, se efectúan dos ajustes preliminares,llamados 0%T y 100%T. El ajuste del 0%T se lleva a cabo mediante un cierre mecánico del detector.

El ajuste de 100%T se hace con el cierre abierto y el solvente en el camino de la luz. Normalmente el solvente está contenido en una celda que es casi idéntica a las que contienen las muestras.

Cuando la celda del solvente es reemplazada por la celda que contiene la muestra, la escala da latransmitancia porcentual.

Los instrumentos actuales poseen un sistema electrónico que realiza la operación matemática y da la respuesta directamente absorbancia. También hay que hacer una calibración previa con el solvente o blanco.

OBJETIVOS

* Averiguar la concentración de una muestra de proteínas por fotocolorimetría.

* Adquirir destrezas en el manejo del fotocolorimetro y en...
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