parametros de validacion

Especificidad: Se determina la especificidad del método a través del análisis cromatográfico de muestras de matrices blanco (n=6) para demostrar la capacidad del mismo de medir los analitos enpresencia de compuestos endógenos. Los mismos son comparados con estándares de los respectivos tejidos adicionados con los analitos.
Estabilidad: Se determina la estabilidad de las muestras almacenadasdurante 60 días. Para lo cual se preparan 6 patrones para cada matriz de una concentración determinada (0,5 µg/g en huevo y 0,25 µg/ml en plasma), de los cuales tres de cada matriz se extraen y analizanen el mismo día de la preparación (día 0). Las 3 replicas restantes son almacenadas a -20 ºC y se analizan a los 60 días (día 60) post almacenamiento.
Se considera que el CV debe ser menor a15-20%.





Linealidad: La linealidad se analiza midiendo la relación concentración de droga/respuesta del detector. Se corren por triplicado patrones de cada una de las moléculas en un rango deconcentración (por ejemplo: 0,1-2 µg/g). Se realizan análisis de regresión lineal utilizando el método de los cuadrados mínimos (INSTAT Graph Pad Software Inc. San Diego, USA), obteniéndose losrespectivos coeficientes de correlación. Las concentraciones de moléculas a determinar, se calculan comparando las áreas bajo el pico de las mismas con aquellas del EI utilizando el software Class LC10(Shimadzu-10A, Kyoto, Japón). Las relaciones de áreas se interpolan en las respectivas curvas de calibración y las concentraciones se calculan de acuerdo a la siguiente ecuación:

Y = a · X + bDónde:
Y = área molécula/área EI
a = pendiente de la línea de regresión
X = concentración de droga en tejido
b = intersección de la recta

Precisión analítica: Larepetibilidad (variabilidad intra-día) del método analítico es la precisión de un método bajo las mismas condiciones operativas durante un corto periodo. La repetibilidad se evalúa determinando el...