Participación Delas Miticondrias En Los Cambios De Fluorecensia Exitacion Y Lapolarización Spectra En Las Celulas Vivas

PARTICIPACIÓN DELAS MITICONDRIAS EN LOS CAMBIOS DE FLUORECENSIA EXITACION Y LAPOLARIZACIÓN SPECTRA EN LAS CELULAS VIVAS
1.-CERCEK Y CERCEK B., Paterson Laboratorios del Hospital Christie y Holt
Radium Institute de Manchester M20 9BX, Inglaterra

RESUMEN.- La comparación de los espectros de fluoresceína polarización de la fluorescencia en las células vivas yaislados en estructuras subcelularesidentificó a la mitocondria como el dominio citoplasmático deque en la excitación a 470 nm de emisión fuerte de fluoresceína pico de polarización a 510 nm esformado. Los cambios en el pico de emisión de polarización durante el ciclo celular o los inducidos por estimuladores del crecimiento y los inhibidores de reflejar los cambios estructurales en la mitocondria en su
transición de los ortodoxosen reposo, en la participación activa, de generación de ATP, la conformación condensaday viceversa. Los posibles mecanismos para la formación del pico de emisión una fuerte polarizaciónSe discuten.
INTRODUCCIÓN
En las células vivas de la polarización de la fluorescencia intracelular con fluoresceína muestra espectros de longitud de ondacambios dependientes que son característicos para el estadofisiológico de estas células.Estos cambios se observó sólo en condiciones espectroscópicas de excitación preferente defluoresceína moléculas que los dominios de la sonda en el que los cambios en el estado físico de organizaciónocurrir (1). Un rasgo característico en condiciones normales GO reposo, o fase G-1, las células es un fuerte
emisión de fluoresceína polarización máxima a 510 nm, quedesaparece en la activación de las células enel ciclo celular (1, 2). Para dilucidar los mecanismos biológicos subyacentes y para averiguar si algunaestructura celular particular, está implicada en la formación de la fuerte emisión de fluoresceínapico de la polarización a 510 nm ya hemos estudiado la polarización de la fluorescencia de fluoresceínaespectros de los componentes subcelulares aislados, i.e., en el jugo celular, los núcleos, microsomas, lisosomas,y las mitocondrias.
MATERIALES Y METODOS
Aislamiento de la célula SapEl jugo celular se preparó a partir de células de hígado de ratas Wistar outbred ratas de acuerdo con una técnica establecida
(3). Todos los procedimientos se realizaron a 0-40C. Las células, se lavaron con Dulbeccotamponada con fosfato salino(PBS, N º de catálogo404, Gibco, Biocult Ltd., Glasgow, Escocia) fueron embalados por centrifugación a145.000 g durante 15 minutos. El sobrenadante se decantó y el sedimento de células se secó con un taco de filtro
papel. El sedimento se transfirió a un tubo de acero inoxidable de fondo plano, y un émbolo de acero inoxidable de0,1 mm de diámetro menor que el diámetro interno del tubo fue forzado hacia abajo en la masacelular conuna prensa de accionamiento manual. Las células se extruyeron a través del hueco entre el émbolo y elcilindro, sus membranas externas se rompa durante la extrusión. Todas las superficies metálicas en contacto con
Las células fueron siliconado. La masa de células rotas se centrifugó a 145.000 g durante 20 min. La
Biophys. J. © Sociedad de Biofísica * 0006-3495/79/12/403/09 $ 1.00 403Volumen 28 de diciembre 1979 403-412
líquido sobrenadante fue retirado y se clarificó por centrifugación a 175.000 g durante 2 h. Cuatro capas fueronformado. La segunda capa clara representación de la savia celular fue utilizado en nuestros
estudios.Preparación de Otras fracciones subcelularesNúcleos, microsomas, lisosomas y mitocondrias se aislaron de las células del hígado de la noche a lamañana muertos de hambre,1 2-semanas de edad Wistar outbred ratas de acuerdo con técnicas establecidas (4).Todos los procedimientos se realizaron a 0-40C. El hígado de 10-12 g se cortó en trozos pequeños, se lavó conPBS, se suspendieron en 3 vol de 0,25 M tampón fosfato sacarosa (pH 7,4), y se homogeneizaron en unPotter-Elvehjen homogenizador de tipo (5) con 4 tiempos con una velocidad de mortero...