pcr Romo

PCR Kary Banks Mullis
son las siglas
Reacción en Cadena de la Polimerasa.(polimeraza: La ADN polimerasa es la principal enzima de la replicación. Partiendo de una cadena inicial o “primer” la ADN polimerasa añade nucleótidos complementarios a la cadena molde extendiendo la nueva cadena de ADN en dirección 5’- 3’.)

Definición
 Con la PCR, cantidades mínimas de material genético puedenser amplificadas millones de veces en pocas horas permitiendo la detección rápida y fiable de los marcadores genéticos de enfermedades infecciosas, cáncer y desórdenes genéticos.
La idea básica de la técnica es sintetizar muchas veces un pedazo o fragmento de ADN utilizando una polimerasa que puede trabajar a temperaturas muy elevadas, ya que proviene de la bacteria Thermus aquaticus que vive aaltas temperaturas (79ºC a 85ºC), de ahí su nombre comercial más conocido: taq polimerasa.

Etapas de la PCR
1- Desnaturalización del ADN doble cadena.
2- Hibridación de los iniciadores a la zona 3´ específica de cada una de las hebras. (alineación)
3- Extensión del cebador por actuación de la DNA polimerasa.
4- repetición del ciclo





1º PCR: Desnaturalización por calor.
El calor(generalmente > 90°C) separa la doble hebra de ADN en dos filamentos, esto se conoce como “desnaturalización".
Puesto que los enlaces del hidrógeno que unen las bases de uno a otro son débiles, se rompen a altas temperaturas, mientras que los enlaces entre fosfatos y desoxirribosa, que son enlaces covalentes más fuertes, permanecen intactos.




 
2º PCR: Alineación
Temperatura deAlineación: generalmente ocurre entre 40°C y 65°C, dependiendo de la longitud y la secuencia de bases de los iniciadores. Permite que éstos se unan a la secuencia diana con alta especificidad.

Paso 3º PCR: Extensión
Una vez que los iniciadores se han unido a las secuencias complementarias de ADN, la temperatura se eleva aproximadamente a 72°C y la enzima Taq polimerasa replica los filamentos de ADN.Paso 4° repetición del ciclo
Se repiten 30 veces en un aparato llamado termociclador. Al final del de 30 ciclos de amplificación existen millones de copias del fragmento de adn. Asi podemos seleccionar un fragmento especifico dentro de todo el adn.







Para que el proceso se lleve a cabo en el tubo de reacción debemos encontrar:
a- ADN objetivo ( el que se quiere amplificar)
b- ADNPolimerasa
c- Deoxinucleótidos
(Un Deoxinucleótidos que carece de un grupo hidroxilo-3´ y por lo tanto es incapaz de formar el enlace de fosfo-diester 3´ 5´ necesario para el alargamiento de la cadena. En si es una enzima estimuladora para alargar la cadena.

d- Primers Para replicar el ADN,
(Los primers, también conocidos como “iniciadores” o
“cebadores”, son cadenas cortas denucleótidos
(oligonucleótidos).( es una secuencia corta de adn)


(Cuando hacemos una reacción de PCR simulamos lo que sucede en una célula cuando se sintetiza el ADN y en el tubo se mezclan todos los ingredientes necesarios para hacerlo:
la polimerasa, el ADN del organismo que queremos estudiar –donde se encuentra el fragmento que queremos sintetizar–
, los oligonucleótidos (llamados tambiénprimers, iniciadores, cebadores, “oligos”, etc.) necesarios para que se inicie la transcripción, , y las condiciones para que la enzima trabaje adecuadamente.)



¿Pero cómo funciona el PCR? Supongamos que ya tenemos los tubos listos con todo lo necesario para que la síntesis del fragmento que nos interesa que se lleve a cabo (taq polimerasa, dinucleótidos, ADN, agua, buffer con magnesio yotras sales, y oligonucleótidos). El siguiente paso es colocar los tubos en una máquina conocida como termociclador, que básicamente sirve para calentarlos o enfriarlos a temperaturas muy precisas.















PROTEINA C REACTIVA
Sinonimia: PCR
Método: técnica de aglutinación (prueba con látex) cualitativa o semicuantitativa, turbidimetría, nefelometría, inmunodifusión...